研究背景肺癌是最常見的癌癥之一,發(fā)病率與死亡率位居惡性腫瘤之首。非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)占所有肺癌診斷病例的80%-85%。隨著放化療、分子靶向治療、免疫治療的廣泛應(yīng)用,NSCLC患者預(yù)后得到明顯改善。然而,因NSCLC早期常無明顯癥狀,40%左右的肺癌患者被確診時(shí)已處于中晚期或已出現(xiàn)轉(zhuǎn)移,包括淋巴結(jié)、腦和肝組織的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等。對于已經(jīng)出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的NSCLC患者目前尚缺乏有效的治療手段,其5年生存率不足15%,復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移仍是NSCLC患者死亡的最主要原因。目前,NSCLC發(fā)生轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制尚未完全闡明,深入研究NSCLC轉(zhuǎn)移相關(guān)的發(fā)病機(jī)制,對尋找有效的治療靶點(diǎn)、提高NSCLC晚期患者的生存率和生活質(zhì)量具有重要意義。細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是上皮細(xì)胞通過特定程序轉(zhuǎn)化為具有間質(zhì)表型細(xì)胞的生物學(xué)過程,在癌癥的轉(zhuǎn)移和多纖維化疾病中發(fā)揮了重要作用。在上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程中,癌癥細(xì)胞由上皮細(xì)胞形態(tài)向間質(zhì)細(xì)胞形態(tài)轉(zhuǎn)化,細(xì)胞間黏附能力減弱,細(xì)胞侵入性和遷移能力增強(qiáng),進(jìn)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)...

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
材料和方法
    1. 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 細(xì)胞株及質(zhì)粒
        1.2 細(xì)胞培養(yǎng)及凍存試劑
        1.3 質(zhì)粒構(gòu)建及提取試劑
        1.4 RNA提取及qRT-PCR試劑
        1.5 蛋白質(zhì)提取試劑
        1.6 細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑
        1.7 抗體
        1.8 Western blot實(shí)驗(yàn)試劑
        1.9 免疫熒光和免疫組化實(shí)驗(yàn)試劑
        1.10 其他試劑
    2. 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    3. 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 主要溶液和試劑的配制
        3.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        3.3 細(xì)胞RNA提取
        3.4 逆轉(zhuǎn)錄和實(shí)時(shí)定量PCR (qRT-PCR)
        3.5 瓊脂糖凝膠電泳
        3.6 免疫組織化學(xué)染色
        3.7 總蛋白提取
        3.8 BCA法測試蛋白濃度
        3.9 Western blot
        3.10 逆轉(zhuǎn)錄病毒制備和感染
        3.11 慢病毒制備和感染
        3.12 注意事項(xiàng)
        3.13 質(zhì)粒構(gòu)建及純化
        3.14 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
        3.15 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)
        3.16 細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)
        3.17 MTT實(shí)驗(yàn)
        3.18 免疫熒光實(shí)驗(yàn)
        3.19 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
結(jié)果
    1. FAM83D在NSCLC細(xì)胞和組織中表達(dá)明顯升高
        1.1 FAM83D在NSCLC細(xì)胞中高表達(dá)
        1.2 FAM83D在NSCLC組織中高表達(dá)
    2. FAM83D促進(jìn)NSCLC細(xì)胞的腫瘤特性
        2.1 構(gòu)建穩(wěn)定沉默和過表達(dá)FAM83D細(xì)胞系
        2.2 FAM83D促進(jìn)NSCLC細(xì)胞增殖
        2.3 FAM83D促進(jìn)NSCLC細(xì)胞EMT的發(fā)生
        2.4 FAM83D促進(jìn)NSCLC細(xì)胞侵襲和遷移的作用
    3. FAM83D調(diào)控AKT/mTOR信號(hào)通路促進(jìn)NSCLC轉(zhuǎn)移
        3.1 FAM83D激活A(yù)KT/mTOR信號(hào)通路
        3.2 FAM83D通過調(diào)控AKT/mTOR通路促進(jìn)NSCLC細(xì)胞EMT及侵襲遷移
討論
展望
附圖
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表的論文
學(xué)位論文評閱及答辯情況表



本文編號(hào)：3888093