【背景和目的】肝細胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是最常見的原發(fā)性肝癌,占肝癌的90%,有數(shù)據(jù)表明:HCC由于其發(fā)病率逐年增加且預(yù)后差現(xiàn)位居世界惡性腫瘤致死病因的第2位。GPC-3是過度生長綜合癥(Simpson Golabi Behmel Syndrome,SGBS)患者中普遍存在的功能突變基因,是蛋白聚糖家族成員之一。GPC-3基因編碼的GPC-3蛋白可通過共受體(co-receptor)與相關(guān)配基如生長因子、細胞黏附分子等共同作用,來參與細胞生物學(xué)行為的調(diào)節(jié)。有學(xué)者認(rèn)為在細胞生長的各個過程包括細胞的繁殖、黏附、分化、遷移等過程中均存在GPC-3的直接或間接調(diào)控。研究發(fā)現(xiàn)HCC患者體內(nèi)的GPC-3表達水平跟健康人及良性肝疾病患者相比顯著升高,正常成人及良性肝疾病患者組織和血清中的GPC-3表達水平極低甚至檢測不到,這表明GPC-3與HCC關(guān)系密切,可能在其發(fā)生發(fā)展中起促進作用。GPC-3是HCC臨床鑒別診斷中有用的特異性標(biāo)志物,又是HCC預(yù)防和免疫治療的新靶點,盡管目前有多篇文章探討其分子機制,它的結(jié)構(gòu)已基本研究清楚,但是其功能尚未完全闡明�；谝陨�...

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
附錄
中文摘要
英文摘要
前言
材料與方法
    1 材料
        1.1 實驗所用細胞系
        1.2 主要溶液配制
    2 方法
        2.1 GPC-3過表達載體及陰性載體的構(gòu)建
        2.2 GPC-3敲除載體的構(gòu)建
        2.3 GPC-3過表達載體及其陰性對照載體的鑒定
        2.4 GPC-3在多株HCC細胞中表達水平的檢測
        2.5 GPC-3過表達穩(wěn)定細胞株的獲得
        2.6 GPC-3敲除穩(wěn)定細胞株的獲得
        2.7 穩(wěn)定細胞株生物學(xué)行為的檢測
        2.8 GPC-3敲除穩(wěn)定細胞株裸鼠皮下成瘤實驗
        2.9 統(tǒng)計學(xué)處理
結(jié)果
    1 GPC-3 過表達慢病毒載體的構(gòu)建和驗證
        1.1 GPC-3過表達慢病毒載體的構(gòu)建
        1.2 GPC-3過表達慢病毒載體的驗證
        1.3 陰性對照載體的構(gòu)建及驗證
    2 GPC-3敲除慢病毒載體的構(gòu)建和驗證
        2.1 GPC-3敲除慢病毒載體的構(gòu)建
        2.2 GPC-3敲除慢病毒載體測序驗證
    3 過表達載體慢病毒的制備和表達
        3.1 過表達載體瞬轉(zhuǎn)入293Ft細胞
        3.2 過表達載體導(dǎo)入293Ft細胞獲取慢病毒
    4 GPC-3敲除載體慢病毒的制備和表達
        4.1 GPC-3敲除載體慢病毒的制備和表達
    5 GPC-3過表達/敲除穩(wěn)定細胞株的獲得和驗證
        5.1 GPC-3穩(wěn)定過表達/敲除穩(wěn)定細胞株的篩選
        5.2 GPC-3穩(wěn)定過表達/敲除細胞株的驗證
    6 GPC-3穩(wěn)定過表達/敲除細胞株生物學(xué)行為的檢測
        6.1 GPC-3穩(wěn)定過表達細胞株生物學(xué)行為的檢測
        6.2 GPC-3穩(wěn)定敲除細胞株生物學(xué)行為的檢測
    7 GPC-3敲除穩(wěn)定細胞株裸鼠成瘤實驗及相關(guān)檢測
        7.1 GPC-3敲除穩(wěn)定細胞株裸鼠成瘤實驗
        7.2 裸鼠瘤體組織檢測
討論
結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝



本文編號：3885328