目的:M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAM)的滲透促進(jìn)惡性腫瘤的惡性進(jìn)展。然而,腫瘤細(xì)胞控制巨噬細(xì)胞募集和M2極化的機(jī)制在很大程度上尚不清楚。NADPH氧化酶4(NOX4)在非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)中大量表達(dá),并介導(dǎo)惡性腫瘤進(jìn)展。NOX家族與腫瘤相關(guān)的炎癥密切相關(guān),然而,腫瘤NOX是否影響微環(huán)境巨噬細(xì)胞尚不明確。NOX4抑制劑GKT137831由于其低毒性,目前用于治療特發(fā)性肺纖維化、糖尿病腎病、原發(fā)性膽源性膽管炎已進(jìn)入臨床試驗(yàn),本研究將探究其用于非小細(xì)胞肺癌治療的療效,為擴(kuò)展臨床適應(yīng)癥提供依據(jù)。方法:(1)使用免疫組織化學(xué)染色法檢測臨床標(biāo)本NOX4、CD206以及CD68的表達(dá)情況;(2)使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測巨噬細(xì)胞IL-10、IL-12以及IL-23的表達(dá)情況以及磷酸化JNK(T183/Y185)、總JNK的水平,檢測非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞CCL7,IL8,CSF-1以及VEGF-C的表達(dá)情況;(3)使用免疫熒光技術(shù)檢測細(xì)胞外過氧化氫的水平;(4)使用蛋白免疫印跡技術(shù)(Western blotting)檢測非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NOX4、beta-Tubulin的表達(dá)情況,檢測巨...

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
第一章 非小細(xì)胞肺癌高水平的NOX4與巨噬細(xì)胞趨化性和M2型巨噬細(xì)胞標(biāo)志物的臨床相關(guān)性
    前言
    1.1 材料與儀器
        1.1.1 主要儀器
        1.1.2 主要試劑和耗材
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 GSEA分析
        1.2.2 臨床標(biāo)本免疫組織化學(xué)(IHC)染色
        1.2.3 染色標(biāo)本的統(tǒng)計(jì)分析
    1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    1.4 討論與小結(jié)
第二章 NOX4促進(jìn)巨噬細(xì)胞遷移和M2型極化
    前言
    2.1 材料與儀器
        2.1.1 主要儀器
        2.1.2 主要試劑和耗材
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.2.3 條件培養(yǎng)基(Conditioned Medium,CM)的制備
        2.2.4 巨噬細(xì)胞趨化實(shí)驗(yàn)(Transwell)
        2.2.5 集落結(jié)晶紫染色
        2.2.6 免疫印跡試驗(yàn)(Western Blotting)
        2.2.7 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
        2.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    2.4 討論與小結(jié)
第三章 NOX4 通過ROS/ PI3K信號傳導(dǎo)誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞產(chǎn)生多種細(xì)胞因子從而促進(jìn)巨噬細(xì)胞遷移和M2型極化
    前言
    3.1 材料與儀器
        3.1.1 主要儀器
        3.1.2 主要試劑和耗材
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2.2 條件培養(yǎng)基(Conditioned Medium,CM)的制備
        3.2.3 巨噬細(xì)胞趨化實(shí)驗(yàn)(Transwell)
        3.2.4 集落結(jié)晶紫染色
        3.2.5 免疫印跡試驗(yàn)(Western Blotting)
        3.2.6 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
        3.2.7 細(xì)胞外過氧化氫的測定
        3.2.8 人細(xì)胞因子抗體芯片檢測
        3.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.4 討論與小結(jié)
第四章 腫瘤NOX4 誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞分泌HB-EGF介導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞體外增殖
    前言
    4.1 材料與儀器
        4.1.1 主要儀器
        4.1.2 主要試劑和和耗材
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 細(xì)胞的培養(yǎng)
        4.2.2 細(xì)胞增殖的評估與集落形成試驗(yàn)
        4.2.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
        4.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.4 討論與小結(jié)
第五章 NOX4增強(qiáng)M2型極化巨噬細(xì)胞的滲透并誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞體內(nèi)增殖
    前言
    5.1 材料與儀器
        5.1.1 主要儀器
        5.1.2 主要試劑和和耗材
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 異種移植腫瘤模型的構(gòu)建
        5.2.2 流式細(xì)胞儀測定異種移植 A549 腫瘤組織的 F4/80 和 CD206 的表達(dá)情況
        5.2.3 細(xì)胞的培養(yǎng)
        5.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    5.4 討論與小結(jié)
第六章 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 展望
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文
主要英文縮略語索引
致謝



本文編號：3877461