目的:M2型腫瘤相關(guān)巨噬細胞(TAM)的滲透促進惡性腫瘤的惡性進展。然而,腫瘤細胞控制巨噬細胞募集和M2極化的機制在很大程度上尚不清楚。NADPH氧化酶4(NOX4)在非小細胞肺癌(NSCLC)中大量表達,并介導惡性腫瘤進展。NOX家族與腫瘤相關(guān)的炎癥密切相關(guān),然而,腫瘤NOX是否影響微環(huán)境巨噬細胞尚不明確。NOX4抑制劑GKT137831由于其低毒性,目前用于治療特發(fā)性肺纖維化、糖尿病腎病、原發(fā)性膽源性膽管炎已進入臨床試驗,本研究將探究其用于非小細胞肺癌治療的療效,為擴展臨床適應(yīng)癥提供依據(jù)。方法:(1)使用免疫組織化學染色法檢測臨床標本NOX4、CD206以及CD68的表達情況;(2)使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測巨噬細胞IL-10、IL-12以及IL-23的表達情況以及磷酸化JNK(T183/Y185)、總JNK的水平,檢測非小細胞肺癌細胞CCL7,IL8,CSF-1以及VEGF-C的表達情況;(3)使用免疫熒光技術(shù)檢測細胞外過氧化氫的水平;(4)使用蛋白免疫印跡技術(shù)(Western blotting)檢測非小細胞肺癌細胞NOX4、beta-Tubulin的表達情況,檢測巨...

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
第一章 非小細胞肺癌高水平的NOX4與巨噬細胞趨化性和M2型巨噬細胞標志物的臨床相關(guān)性
    前言
    1.1 材料與儀器
        1.1.1 主要儀器
        1.1.2 主要試劑和耗材
    1.2 實驗方法
        1.2.1 GSEA分析
        1.2.2 臨床標本免疫組織化學(IHC)染色
        1.2.3 染色標本的統(tǒng)計分析
    1.3 實驗結(jié)果
    1.4 討論與小結(jié)
第二章 NOX4促進巨噬細胞遷移和M2型極化
    前言
    2.1 材料與儀器
        2.1.1 主要儀器
        2.1.2 主要試劑和耗材
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2.2 細胞轉(zhuǎn)染
        2.2.3 條件培養(yǎng)基(Conditioned Medium,CM)的制備
        2.2.4 巨噬細胞趨化實驗(Transwell)
        2.2.5 集落結(jié)晶紫染色
        2.2.6 免疫印跡試驗(Western Blotting)
        2.2.7 酶聯(lián)免疫吸附試驗
        2.2.8 統(tǒng)計學方法
    2.3 實驗結(jié)果
    2.4 討論與小結(jié)
第三章 NOX4 通過ROS/ PI3K信號傳導誘導非小細胞肺癌細胞產(chǎn)生多種細胞因子從而促進巨噬細胞遷移和M2型極化
    前言
    3.1 材料與儀器
        3.1.1 主要儀器
        3.1.2 主要試劑和耗材
    3.2 實驗方法
        3.2.1 細胞培養(yǎng)
        3.2.2 條件培養(yǎng)基(Conditioned Medium,CM)的制備
        3.2.3 巨噬細胞趨化實驗(Transwell)
        3.2.4 集落結(jié)晶紫染色
        3.2.5 免疫印跡試驗(Western Blotting)
        3.2.6 酶聯(lián)免疫吸附試驗
        3.2.7 細胞外過氧化氫的測定
        3.2.8 人細胞因子抗體芯片檢測
        3.2.9 統(tǒng)計學方法
    3.3 實驗結(jié)果
    3.4 討論與小結(jié)
第四章 腫瘤NOX4 誘導巨噬細胞分泌HB-EGF介導非小細胞肺癌細胞體外增殖
    前言
    4.1 材料與儀器
        4.1.1 主要儀器
        4.1.2 主要試劑和和耗材
    4.2 實驗方法
        4.2.1 細胞的培養(yǎng)
        4.2.2 細胞增殖的評估與集落形成試驗
        4.2.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗
        4.2.4 統(tǒng)計學方法
    4.3 實驗結(jié)果
    4.4 討論與小結(jié)
第五章 NOX4增強M2型極化巨噬細胞的滲透并誘導非小細胞肺癌細胞體內(nèi)增殖
    前言
    5.1 材料與儀器
        5.1.1 主要儀器
        5.1.2 主要試劑和和耗材
    5.2 實驗方法
        5.2.1 異種移植腫瘤模型的構(gòu)建
        5.2.2 流式細胞儀測定異種移植 A549 腫瘤組織的 F4/80 和 CD206 的表達情況
        5.2.3 細胞的培養(yǎng)
        5.2.4 統(tǒng)計學方法
    5.3 實驗結(jié)果
    5.4 討論與小結(jié)
第六章 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 展望
參考文獻
攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文
主要英文縮略語索引
致謝



本文編號：3877461