藻藍(lán)蛋白是我國允許使用的天然食品著色劑之一,同時也是一種重要的安全無副作用的功能性食用色素。本研究以非小細(xì)胞肺癌A549、H1299、H460和LTEP-a-2四種細(xì)胞系作為模型,研究藻藍(lán)蛋白在肺癌中的功能及其潛在的調(diào)控途徑。首先對藻藍(lán)蛋白處理后的肺癌細(xì)胞的存活率和生長曲線進(jìn)行了測定,結(jié)果顯示處理組的細(xì)胞存活率和生長速率顯著下降,說明藻藍(lán)蛋白能夠抑制肺癌細(xì)胞的增殖。為了進(jìn)一步探究藻藍(lán)蛋白是如何抑制細(xì)胞的增殖,利用流式細(xì)胞術(shù)檢測了細(xì)胞的周期分布情況,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞周期轉(zhuǎn)換點(diǎn)相關(guān)基因(CyclinE、CyclinA)的表達(dá)異常而引起細(xì)胞發(fā)生G1(LTEP-a-2細(xì)胞)或S期(A549、H1299、H460細(xì)胞)阻滯。為了分析藻藍(lán)蛋白處理后對肺癌細(xì)胞的群體依賴性和增殖能力的影響,檢測了藻藍(lán)蛋白處理后細(xì)胞的集落的形成能力,結(jié)果表明,與對照組相比,藻藍(lán)蛋白能夠使肺癌細(xì)胞的集落克隆數(shù)顯著下降,即藻藍(lán)蛋白能夠降低肺癌細(xì)胞的獨(dú)立生存能力和環(huán)境適應(yīng)能力。最后利用劃痕修復(fù)試驗(yàn)探究了藻藍(lán)蛋白處理后的肺癌細(xì)胞體外遷移能力,結(jié)果表明,藻藍(lán)蛋白處理后的細(xì)胞遷移率有顯著降低,說明藻藍(lán)蛋白能夠抑制非小細(xì)胞肺癌的遷移能力,緊...

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 緒論
    1.1 藻藍(lán)色素蛋白研究現(xiàn)狀
    1.2 轉(zhuǎn)錄組學(xué)
    1.3 PI3-AKT信號通路
    1.4 NF-κB信號通路
    1.5 研究目的與內(nèi)容
        1.5.1 研究目的與意義
        1.5.2 研究內(nèi)容
            1.5.2.1 藻藍(lán)色素蛋白對細(xì)胞增殖及遷移的影響
            1.5.2.2 藻藍(lán)色素蛋白對細(xì)胞凋亡的影響
            1.5.2.3 轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析及驗(yàn)證
        1.5.3 技術(shù)路線
第2章 藻藍(lán)色素蛋白對非小細(xì)胞肺癌體外增殖及遷移的影響
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 材料與試劑
        2.1.2 儀器與設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 MTT法測定肺癌細(xì)胞生長曲線
        2.2.3 吉姆薩染色檢測肺癌細(xì)胞的集落形成能力
        2.2.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期
        2.2.5 體外劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)
        2.2.6 提取細(xì)胞總RNA
        2.2.7 反轉(zhuǎn)錄、實(shí)時熒光定量PCR
        2.2.8 提取細(xì)胞或組織的全蛋白
        2.2.9 Western Blot免疫印跡
    2.3 研究結(jié)果
        2.3.1 藻藍(lán)蛋白對肺癌細(xì)胞的體外增殖能力的影響
        2.3.2 藻藍(lán)蛋白對肺癌細(xì)胞集落形成能力的影響
        2.3.3 藻藍(lán)蛋白對肺癌細(xì)胞的周期分布的影響
        2.3.4 藻藍(lán)蛋白對肺癌細(xì)胞的體外遷移能力的影響
    2.4 小結(jié)
第3章 藻藍(lán)色素蛋白對非小細(xì)胞肺癌體外凋亡的影響
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 材料與試劑
        3.1.2 儀器與設(shè)備
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 倒置顯微鏡觀察藻藍(lán)蛋白對肺癌細(xì)胞形態(tài)的影響
        3.2.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡
        3.2.3 反轉(zhuǎn)錄、實(shí)時熒光定量PCR
    3.3 研究結(jié)果
        3.3.1 藻藍(lán)蛋白對肺癌細(xì)胞形態(tài)的影響
        3.3.2 藻藍(lán)蛋白對肺癌細(xì)胞凋亡的影響
        3.3.3 藻藍(lán)蛋白影響凋亡相關(guān)基因的表達(dá)
        3.3.4 藻藍(lán)蛋白影響凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)
    3.4 小結(jié)
第4章 轉(zhuǎn)錄組學(xué)對藻藍(lán)蛋白調(diào)控非小細(xì)胞肺癌生物學(xué)過程的分析及驗(yàn)證
    4.1 實(shí)驗(yàn)方法
        4.1.1 提取total RNA
        4.1.2 反轉(zhuǎn)合成c DNA
    4.2 研究結(jié)果
        4.2.1 RNA的完整度檢測
        4.2.2 測序飽和度分析
        4.2.3 冗余序列分析
        4.2.4 表達(dá)量分析
        4.2.5 樣本聚類分析
        4.2.6 表達(dá)差異分析
        4.2.7 差異基因GO分類統(tǒng)計(jì)
        4.2.8 差異基因KEGG通路富集分析
        4.2.9 差異基因KEGG通路可視化
        4.2.10 調(diào)控PI3-AKT與NF-κB相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平檢測
        4.2.11 藻藍(lán)蛋白對PI3-AKT通路活性的影響
        4.2.12 藻藍(lán)蛋白對NF-κB通路活性的影響
    4.3 小結(jié)
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
附錄
研究成果
致謝



本文編號：3871972