目的:腫瘤嚴(yán)重危害人類生命健康,能量代謝異常是腫瘤的特征性病理變化之一。有研究表明,腫瘤細(xì)胞即使在有氧的情況下,也選擇糖酵解的方式進(jìn)行糖的代謝以提供能量(即著名的瓦伯格效應(yīng))。這種有氧糖酵解最終將導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞微環(huán)境中乳酸水平的增加,并在腫瘤侵襲、遷移、免疫逃逸等方面發(fā)揮重要作用。但是腫瘤微環(huán)境中乳酸水平增高對微環(huán)境中腫瘤細(xì)胞,尤其是相應(yīng)正常細(xì)胞的影響及其機(jī)制,尚不十分清楚。我們推測上述乳酸水平增高不僅有助于腫瘤細(xì)胞的增殖,同時還將脅迫腫瘤細(xì)胞周圍正常細(xì)胞改變自身的能量代謝方式,通過上調(diào)LDHB表達(dá),發(fā)生類腫瘤樣能量代謝方式的變化。比較LDHB在不同腫瘤細(xì)胞和相應(yīng)正常細(xì)胞之間的表達(dá);探討LDHB對不同腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞增殖能力的影響。對抗或抑制LDHB基因表達(dá)將抑制正常細(xì)胞代謝發(fā)生異常,有望成為抗腫瘤作用的新靶點。本文以LDHB為靶點,結(jié)合基因敲除和基因過表達(dá)技術(shù),對乳酸對腫瘤及相應(yīng)正常細(xì)胞增殖的作用,以及與LDHB間的關(guān)系進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究,力圖探索腫瘤發(fā)生的新機(jī)制,為尋找抗腫瘤藥物作用的新靶點和抗腫瘤新藥研發(fā)提供理論依據(jù)。方法:Western blot檢測不同腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞之間...

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 緒論
    1.1 Warburg效應(yīng)與腫瘤能量代謝
    1.2 乳酸的促腫瘤作用
    1.3 LDHB與腫瘤
    1.4 目的及意義
第2章 實驗材料
    2.1 材料與試劑
        2.1.1 細(xì)胞株
        2.1.2 試劑與耗材
        2.1.3 主要試劑配制
    2.2 主要儀器
第3章 實驗方法
    3.1 MDA-MB-231、HepG2、HGC-27、MCF-10A、L02、GES-1 細(xì)胞的培養(yǎng)
    3.2 乳酸處理MCF-10A、L02、GES-1 細(xì)胞
    3.3 穩(wěn)定細(xì)胞株的構(gòu)建
        3.3.1 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化
        3.3.2 質(zhì)粒提取
        3.3.3 轉(zhuǎn)染
    3.4 G148篩選
    3.5 瞬時轉(zhuǎn)染
    3.6 MTT檢測
    3.7 EDU實驗
    3.8 Western blot實驗
    3.9 劃痕實驗
    3.10 統(tǒng)計分析
第4章 實驗結(jié)果
    4.1 LDHB在正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中蛋白表達(dá)水平的差異
    4.2 LDHB高表達(dá)的腫瘤細(xì)胞,乳酸對其活力的影響
    4.3 腫瘤細(xì)胞敲低LDHB后乳酸對其細(xì)胞活力的影響
        4.3.1 腫瘤細(xì)胞敲低LDHB的驗證
        4.3.2 乳酸對敲低LDHB的腫瘤細(xì)胞活力的影響
    4.4 LDHB低表達(dá)的正常細(xì)胞,乳酸對其活力的影響
    4.5 正常細(xì)胞過表達(dá)LDHB后乳酸對其細(xì)胞活力的影響
        4.5.1 正常細(xì)胞過表達(dá)LDHB的驗證
        4.5.2 乳酸對過表達(dá)LDHB正常細(xì)胞活力的影響
    4.6 乳酸對正常細(xì)胞LDHB蛋白水平的影響
第5章 討論
第6章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
碩士期間發(fā)表的論文
致謝



本文編號：3820151