胃癌是消化系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤,發(fā)病率和死亡率在所有惡性腫瘤中也均位居前列,對患者身心造成巨大威脅的同時也消耗了極大的衛(wèi)生資源,為社會帶來沉重負擔(dān)。我國是胃癌高發(fā)區(qū),據(jù)統(tǒng)計,胃癌每年新發(fā)病例和死亡病例占世界總數(shù)的40%左右。近年來,胃癌的總體發(fā)病率和死亡率較前有所下降,但早發(fā)性胃癌和家族性胃癌(Familial Gastric Cancer,FGC)的發(fā)病率仍逐年攀升。大部分胃癌為散發(fā)病例,約10%表現(xiàn)為家族聚集性,家族性胃癌具有發(fā)病年齡早、預(yù)后差、腫瘤分化差等特點,目前仍缺乏特異和靈敏的診斷方法。近年來分子生物學(xué)和遺傳學(xué)發(fā)展迅速,越來越多學(xué)者認(rèn)為在家族性胃癌的發(fā)病過程中遺傳因素發(fā)揮了重要作用。因此,探索家族性胃癌的發(fā)病因素,并研究其在疾病發(fā)生發(fā)展中的作用和機制,有著重要的社會意義和經(jīng)濟意義。受制于家族性胃癌家系尋找困難等因素,我國對家族性胃癌方面的研究起步較晚,除E-鈣粘素蛋白(CDH1)外,缺乏其他易感基因的相關(guān)報道,本研究前期在全國范圍內(nèi)收集了符合診斷標(biāo)準(zhǔn)的16個家族性胃癌家系,進行高通量全外顯子測序后,在其中6個家系發(fā)現(xiàn)了位于X染色體的腺嘌呤核苷酸轉(zhuǎn)運體2(adenine nu...

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【學(xué)位級別】：碩士

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第一章 前言
    1.1 胃癌的流行病學(xué)分析
    1.2 胃癌病因及發(fā)病機制
        1.2.1 環(huán)境因素
        1.2.2 飲食因素
        1.2.3 幽門螺桿菌感染
        1.2.4 慢性胃病病史
        1.2.5 遺傳因素
    1.3 胃癌的病理分型
    1.4 胃癌的分期
    1.5 胃癌的診斷、治療及預(yù)后
    1.6 家族性胃癌概述
    1.7 胃癌易感基因研究現(xiàn)狀
        1.7.1 CDH1基因
        1.7.2 P53基因
        1.7.3 其他基因
    1.8 我國家族性胃癌研究現(xiàn)狀
    1.9 ANT2基因簡介
    1.10 研究目的及意義
第二章 實驗材料與實驗方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 家族性胃癌家系來源
        2.1.2 細胞系來源
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 主要試劑
        2.1.5 胃癌組織及組織芯片來源
    2.2 實驗方法
        2.2.1 敲減及過表達載體的構(gòu)建及質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化
        2.2.2 質(zhì)粒提取(小提中量)
        2.2.3 DNA樣品瓊脂糖凝膠電泳
        2.2.4 DNA片段回收
        2.2.5 PCR擴增目的cDNA序列
        2.2.6 DNA的限制性內(nèi)切酶消化
        2.2.7 Trizol法提取RNA
        2.2.8 RNA的反轉(zhuǎn)錄
        2.2.9 實時熒光定量PCR
        2.2.10 蛋白提取實驗
        2.2.11 免疫印跡Western blot
        2.2.12 細胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染
        2.2.13 Transwell實驗
        2.2.14 細胞劃痕實驗
        2.2.15 細胞平板克隆實驗
        2.2.16 細胞增殖實驗
        2.2.17 免疫組化實驗
        2.2.18 裸鼠皮下移植瘤注射
        2.2.19 數(shù)據(jù)庫分析與ANT2相關(guān)的信號通路與蛋白
第三章 實驗結(jié)果
    3.1 對所收集的家族性胃癌家系樣品進行外顯子高通置測序及分析
    3.2 胃癌組織中ANT2的表達情況
    3.3 ANT2穩(wěn)定敲減胃癌細胞株及過表達細胞株的構(gòu)建及鑒定
    3.4 敲減及過表達ANT2對胃癌細胞體外克隆形成能力的影響
    3.5 敲減及過表達ANT2對胃癌細胞體外遷移能力的影響
    3.6 敲減及過表達ANT2對胃癌細胞體外增殖能力的影響
    3.7 ANT2在組織水平的表達情況
    3.8 ANT2的表達水平與預(yù)后相關(guān)性
    3.9 敲減ANT2對胃癌細胞體內(nèi)成瘤能力的影響
    3.10 GSEA分析ANT2與凋亡相關(guān)信號通路相關(guān)性
    3.11數(shù)據(jù)庫分析與ANT2共作用的基因
第四章 討論
參考文獻
致謝



本文編號：3766318