肺癌是所有惡性腫瘤中發(fā)病率最高、病死率最高的一種疾病,目前已是世界范圍內(nèi)惡性腫瘤致死的首位因素。2018年中國最新癌癥報告顯示,中國每年肺癌發(fā)病約78.1萬,死亡病例約62.6萬。根據(jù)生物學(xué)特性,肺癌可分為非小細胞肺癌(NSCLC)和小細胞肺癌(SCLC)兩大類。其中,NSCLC占所有病例的80%⁸5%。雖然肺癌的基礎(chǔ)研究和治療方面取得了一些突破,但近30年來肺癌患者的5年生存率仍然停留在15%左右。肺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移能力強是導(dǎo)致肺癌治療效果不佳的罪魁禍首,臨床上近80%的NSCLC在確診時已經(jīng)發(fā)生了區(qū)域淋巴結(jié)或者遠處臟器的轉(zhuǎn)移。因此深入揭示肺癌侵襲和轉(zhuǎn)移的分子機制具有重要的理論和臨床價值,通過對這些分子的檢測,不僅有助于判斷肺癌的轉(zhuǎn)移與預(yù)后,而且也可為阻斷肺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移提供了有價值的分子靶標。蛋白質(zhì)的泛素化降解途徑是泛素與一系列關(guān)聯(lián)酶協(xié)同作用,降解泛素化的蛋白質(zhì)的過程。這一過程中的系列關(guān)聯(lián)酶主要由泛素激活酶(Ubiquitin-activating enzyme,E1)、泛素結(jié)合酶(Ubiquitin-conjugating enzyme,E2)與泛素連接酶(U...

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
英文縮略詞
前言
第一部分 E3連接酶RNF38在NSCLC中表達及與NSCLC臨床病理參數(shù)的關(guān)系
    1.1. 材料與方法
        1.1.1. 材料
            1.1.1.1 .組織標本
            1.1.1.2 .主要試劑和耗材
            1.1.1.3 .主要實驗儀器
        1.1.2. 方法
            1.1.2.1 .組織RNA的抽提
            1.1.2.2 .cDNA的合成
            1.1.2.4 .組織蛋白的提取
            1.1.2.5 .BCA法蛋白濃度測定
            1.1.2.6 .蛋白免疫印跡(WesternBlot)
            1.1.2.7 .組織芯片及免疫組織化學(xué)染色
            1.1.2.8 .免疫組化結(jié)果判定
            1.1.2.9 .統(tǒng)計分析
    1.2 .結(jié)果
        1.2.1 .RNF38在NSCLC組織中的表達高于相應(yīng)癌旁組織
        1.2.2 .大樣本免疫組化結(jié)果進一步證實RNF38在NSCLC中高表達
        1.2.3 .RNF38表達與NSCLC癌患臨床病理特征間的關(guān)系
    1.3 .討論
    1.4 .結(jié)論
第二部分 RNF38誘導(dǎo)細胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化促進NSCLC侵襲轉(zhuǎn)移
    2.1 .材料與方法
        2.1.1 .材料
            2.1.1.1 .細胞株
            2.1.1.2 .干擾質(zhì)粒
            2.1.1.3 .主要試劑和耗材
            2.1.1.4 .主要實驗儀器
        2.1.2 .方法
            2.1.2.1 .細胞復(fù)蘇
            2.1.2.2 .細胞培養(yǎng)
            2.1.2.3 .細胞傳代
            2.1.2.4 .細胞凍存
            2.1.2.5 .細胞RNA的抽提
            2.1.2.6 .Real-timePCR
            2.1.2.7 .細胞蛋白的提取
            2.1.2.8 .蛋白免疫印跡
            2.1.2.9 .慢病毒轉(zhuǎn)染貼壁細胞
            2.1.2.10 .shRNA干擾效率檢測
            2.1.2.11 .Transwell小室侵襲遷移細胞實驗
            2.1.2.12 .細胞劃痕實驗
            2.1.2.13 .CCK-8實驗
            2.1.2.14 .細胞免疫熒光檢測
            2.1.2.15 .統(tǒng)計分析
    2.2 .結(jié)果
        2.2.1 .在NSCLC細胞系及正常細胞中檢測RNF38的表達情況
        2.2.2 .shRNA干擾細胞模型構(gòu)建
        2.2.3 .RNF38對NSCLC細胞侵襲能力的影響
        2.2.4 .RNF38對NSCLC細胞遷移能力的影響
        2.2.5 .RNF38對NSCLC增殖能力的影響
        2.2.6 .RNF38可誘導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化
    2.3 .討論
    2.4 .結(jié)論
第三部分 RNF38泛素化降解DSG1蛋白參與NSCLC侵襲轉(zhuǎn)移
    3.1 .材料與方法
        3.1.1 .材料
            3.1.1.1 .細胞株
            3.1.1.2 .干擾、標簽質(zhì)粒
            3.1.1.3 .主要試劑和耗材
            3.1.1.4 .主要實驗儀器
        3.1.2 方法
            3.1.2.1 .免疫共沉淀
            3.1.2.3 .蛋白免疫印跡
            3.1.2.4 .qRT-PCR
            3.1.2.5 .細胞轉(zhuǎn)染及鑒定
            3.1.2.6 .Transwell小室細胞實驗
            3.1.2.7 .統(tǒng)計分析
    3.2 .結(jié)果
        3.2.1 .免疫共沉淀后質(zhì)譜分析
        3.2.2 .Desmoglein-1為RNF38底物
        3.2.3 .DSG1在NSCLC細胞中表達
        3.2.4 .進一步確立RNF38與DSG1間的相互作用
        3.2.5 .NSCLC細胞中RNF38蛋白表達對DSG1蛋白影響
        3.2.6 .DSG1影響RNF38功能
    3.3 .討論
    3.4 .結(jié)論
第四部分 RNF38與DSG1蛋白表達與NSCLC癌患者預(yù)后相關(guān)
    4.1 .材料與方法
        4.1.1 .材料
            4.1.1.2 .主要試劑和耗材
        4.1.2 .方法
            4.1.2.4 .免疫組化結(jié)果判定
            4.1.2.5 .統(tǒng)計分析
    4.2 .結(jié)果
        4.2.1 .組織芯片免疫組化進一步證實DSG1在NSCLC中的表達與RNF38之間的關(guān)系
        4.2.2 .RNF38/DSG1表達與NSCLC患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系
        4.2.3 .RNF38與DSG1表達與NSCLC患者預(yù)后的關(guān)系
    4.3 .討論
    4.4 .結(jié)論
總結(jié)
參考文獻
致謝
攻讀學(xué)位期間的研究成果
    一、已發(fā)表論文
綜述
    參考文獻



本文編號：3757823