目的:通過體外實驗證實乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7細胞源胞外囊泡(Extracellular Vesicles,EVs)對人臍靜脈內皮細胞(Human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)生物學特性的影響,以及HUVEC源性EVs對MDA-MB-231和MCF-7細胞生物學特性的影響,探討兩種細胞間的相互作用關系,以期說明血管內皮細胞參與腫瘤進程的可能作用機制,并為乳腺癌的治療提供新的策略和思路。方法:(1)采用差速超速離心法分離乳腺癌細胞源EVs,透射電鏡觀察乳腺癌細胞源EVs形態(tài);Nanosight檢測乳腺癌細胞源EVs的粒徑分布;Western blot檢測乳腺癌細胞源EVs表面蛋白CD9、CD63的表達情況。(2)免疫熒光觀察乳腺癌細胞源EVs被HUVEC內化過程。(3)通過MTT法和平板克隆實驗檢測乳腺癌細胞源EVs對HUVEC的增殖影響,觀察不同濃度乳腺癌細胞源EVs處理后HUVEC的形態(tài)學變化;通過劃痕實驗和Transwell實驗檢測乳腺癌細胞源EVs對HUVEC遷移作用;通過成管實驗檢測乳腺癌細胞源EVs對HUVEC的成...

【文章頁數】：80 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略詞中英文注釋表
第一章 緒論
    1.1.乳腺癌
    1.2.血管內皮細胞
        1.2.1.血管內皮細胞
        1.2.2.人臍靜脈內皮細胞
        1.2.3.血管生成與腫瘤
    1.3.胞外囊泡
        1.3.1.胞外囊泡的定義和形成
        1.3.2.胞外囊泡的分離方法
        1.3.3.胞外囊泡與血管生成
        1.3.4.胞外囊泡與腫瘤
        1.3.5.胞外囊泡的治療潛力
第二章 研究目的、方法、方案及意義
    2.1.研究目的
    2.2.研究方法和內容
        2.2.1.乳腺癌細胞源EVs的分離和鑒定
        2.2.2.乳腺癌細胞源EVs對 HUVEC生物學特性的影響
        2.2.3.HUVEC-EVs對乳腺癌細胞生物學特性的影響
    2.3.研究意義
第三章 乳腺癌細胞源EVs的分離和鑒定
    3.1.試劑材料與儀器
        3.1.1.實驗細胞
        3.1.2.實驗試劑和耗材
        3.1.3.實驗儀器
    3.2.相關溶液的配制
        3.2.1.H-DMEM營養(yǎng)液(1000 ml)
        3.2.2.雙抗的配制
        3.2.3.0.25%胰酶的配制(1000 ml)
        3.2.4.PBS的配制(1000 ml)
        3.2.5.凍存液的配制(10 ml)
    3.3.實驗方法
        3.3.1.細胞的傳代培養(yǎng)
        3.3.2.細胞的凍存與復蘇
        3.3.3.細胞上清液的制備
        3.3.4.乳腺癌細胞源EVs的分離
        3.3.5.乳腺癌細胞源EVs的鑒定
            3.3.5.1.透射電鏡觀察乳腺癌細胞源EVs形態(tài)特征
            3.3.5.2.NTA粒徑分析檢測乳腺癌細胞源EVs大小
            3.3.5.3 Western blot檢測乳腺癌細胞源EVs標志蛋白
    3.4.實驗結果
        3.4.1.乳腺癌細胞源EVs的形態(tài)學特征
        3.4.2.粒徑分析檢測乳腺癌細胞源EVs大小
        3.4.3.Western blot檢測乳腺癌細胞源EVs表面標志蛋白
    3.5.討論
第四章 乳腺癌細胞源EVs對HUVEC生物學特性的影響
    4.1.試劑材料與儀器
        4.1.1.實驗細胞
        4.1.2.實驗試劑和耗材
        4.1.3.實驗儀器
    4.2.相關溶液的配制
        4.2.1.MTT的配制
        4.2.2.Western blot相關試劑的配制
        4.2.3.AG490 抑制劑的配制
    4.3.實驗方法
        4.3.1.乳腺癌細胞源EVs內化檢測
        4.3.2.MTT實驗
        4.3.3.平板克隆實驗
        4.3.4.Transwell遷移實驗
        4.3.5.劃痕實驗
        4.3.6.成管實驗
        4.3.7.細胞蛋白的提取
        4.3.8.Western blot
        4.3.9.統(tǒng)計分析
    4.4.實驗結果
        4.4.1.乳腺癌細胞源EVs內化實驗
        4.4.2.乳腺癌細胞源EVs對 HUVEC增殖的影響
        4.4.3.乳腺癌細胞源EVs對 HUVEC克隆形成能力的影響
        4.4.4.乳腺癌細胞源EVs對 HUVEC遷移能力的影響
        4.4.5.乳腺癌細胞源EVs對 HUVEC成管能力的影響
        4.4.6.乳腺癌細胞源EVs對 HUVEC相關蛋白表達的影響
        4.4.7.乳腺癌細胞源EVs對 AG490 抑制劑處理后HUVEC克隆形成的影響
        4.4.8.乳腺癌細胞源EVs對 AG490 抑制劑處理后HUVEC遷移能力的影響
        4.4.9.乳腺癌細胞源EVs對 AG490 抑制劑處理后HUVEC成管能力的影響
        4.4.10.乳腺癌細胞源EVs對 AG490 抑制劑處理后HUVEC相關蛋白表達的影響
    4.5.討論
第五章 HUVEC-EVs對乳腺癌細胞生物學特性的影響
    5.1.試劑材料與儀器
        5.1.1.實驗試劑和耗材
        5.1.2.實驗儀器
    5.2.實驗方法
        5.2.1.Transwell侵襲實驗
        5.2.2.統(tǒng)計分析
    5.3.實驗結果
        5.3.1.HUVEC-EVs對乳腺癌細胞增殖的影響
        5.3.2.HUVEC-EVs對乳腺癌細胞克隆形成能力的影響
        5.3.3.HUVEC-EVs對乳腺癌細胞遷移能力的影響
        5.3.4.HUVEC-EVs對乳腺癌細胞侵襲能力的影響
        5.3.5.HUVEC-EVs對乳腺癌細胞相關蛋白表達的影響
    5.4.討論
第六章 主要結論與展望
    6.1.主要結論
    6.2.展望
參考文獻
致謝
攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術論文、獲獎及參加會議
    一、發(fā)表論文情況
    二、獲獎情況
    三、參加會議情況



本文編號：3755168