目的:通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7細(xì)胞源胞外囊泡(Extracellular Vesicles,EVs)對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)生物學(xué)特性的影響,以及HUVEC源性EVs對(duì)MDA-MB-231和MCF-7細(xì)胞生物學(xué)特性的影響,探討兩種細(xì)胞間的相互作用關(guān)系,以期說(shuō)明血管內(nèi)皮細(xì)胞參與腫瘤進(jìn)程的可能作用機(jī)制,并為乳腺癌的治療提供新的策略和思路。方法:(1)采用差速超速離心法分離乳腺癌細(xì)胞源EVs,透射電鏡觀察乳腺癌細(xì)胞源EVs形態(tài);Nanosight檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞源EVs的粒徑分布;Western blot檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞源EVs表面蛋白CD9、CD63的表達(dá)情況。(2)免疫熒光觀察乳腺癌細(xì)胞源EVs被HUVEC內(nèi)化過(guò)程。(3)通過(guò)MTT法和平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞源EVs對(duì)HUVEC的增殖影響,觀察不同濃度乳腺癌細(xì)胞源EVs處理后HUVEC的形態(tài)學(xué)變化;通過(guò)劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞源EVs對(duì)HUVEC遷移作用;通過(guò)成管實(shí)驗(yàn)檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞源EVs對(duì)HUVEC的成...

【文章頁(yè)數(shù)】：80 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略詞中英文注釋表
第一章 緒論
    1.1.乳腺癌
    1.2.血管內(nèi)皮細(xì)胞
        1.2.1.血管內(nèi)皮細(xì)胞
        1.2.2.人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞
        1.2.3.血管生成與腫瘤
    1.3.胞外囊泡
        1.3.1.胞外囊泡的定義和形成
        1.3.2.胞外囊泡的分離方法
        1.3.3.胞外囊泡與血管生成
        1.3.4.胞外囊泡與腫瘤
        1.3.5.胞外囊泡的治療潛力
第二章 研究目的、方法、方案及意義
    2.1.研究目的
    2.2.研究方法和內(nèi)容
        2.2.1.乳腺癌細(xì)胞源EVs的分離和鑒定
        2.2.2.乳腺癌細(xì)胞源EVs對(duì) HUVEC生物學(xué)特性的影響
        2.2.3.HUVEC-EVs對(duì)乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響
    2.3.研究意義
第三章 乳腺癌細(xì)胞源EVs的分離和鑒定
    3.1.試劑材料與儀器
        3.1.1.實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        3.1.2.實(shí)驗(yàn)試劑和耗材
        3.1.3.實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2.相關(guān)溶液的配制
        3.2.1.H-DMEM營(yíng)養(yǎng)液(1000 ml)
        3.2.2.雙抗的配制
        3.2.3.0.25%胰酶的配制(1000 ml)
        3.2.4.PBS的配制(1000 ml)
        3.2.5.凍存液的配制(10 ml)
    3.3.實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1.細(xì)胞的傳代培養(yǎng)
        3.3.2.細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇
        3.3.3.細(xì)胞上清液的制備
        3.3.4.乳腺癌細(xì)胞源EVs的分離
        3.3.5.乳腺癌細(xì)胞源EVs的鑒定
            3.3.5.1.透射電鏡觀察乳腺癌細(xì)胞源EVs形態(tài)特征
            3.3.5.2.NTA粒徑分析檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞源EVs大小
            3.3.5.3 Western blot檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞源EVs標(biāo)志蛋白
    3.4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1.乳腺癌細(xì)胞源EVs的形態(tài)學(xué)特征
        3.4.2.粒徑分析檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞源EVs大小
        3.4.3.Western blot檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞源EVs表面標(biāo)志蛋白
    3.5.討論
第四章 乳腺癌細(xì)胞源EVs對(duì)HUVEC生物學(xué)特性的影響
    4.1.試劑材料與儀器
        4.1.1.實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        4.1.2.實(shí)驗(yàn)試劑和耗材
        4.1.3.實(shí)驗(yàn)儀器
    4.2.相關(guān)溶液的配制
        4.2.1.MTT的配制
        4.2.2.Western blot相關(guān)試劑的配制
        4.2.3.AG490 抑制劑的配制
    4.3.實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1.乳腺癌細(xì)胞源EVs內(nèi)化檢測(cè)
        4.3.2.MTT實(shí)驗(yàn)
        4.3.3.平板克隆實(shí)驗(yàn)
        4.3.4.Transwell遷移實(shí)驗(yàn)
        4.3.5.劃痕實(shí)驗(yàn)
        4.3.6.成管實(shí)驗(yàn)
        4.3.7.細(xì)胞蛋白的提取
        4.3.8.Western blot
        4.3.9.統(tǒng)計(jì)分析
    4.4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.4.1.乳腺癌細(xì)胞源EVs內(nèi)化實(shí)驗(yàn)
        4.4.2.乳腺癌細(xì)胞源EVs對(duì) HUVEC增殖的影響
        4.4.3.乳腺癌細(xì)胞源EVs對(duì) HUVEC克隆形成能力的影響
        4.4.4.乳腺癌細(xì)胞源EVs對(duì) HUVEC遷移能力的影響
        4.4.5.乳腺癌細(xì)胞源EVs對(duì) HUVEC成管能力的影響
        4.4.6.乳腺癌細(xì)胞源EVs對(duì) HUVEC相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
        4.4.7.乳腺癌細(xì)胞源EVs對(duì) AG490 抑制劑處理后HUVEC克隆形成的影響
        4.4.8.乳腺癌細(xì)胞源EVs對(duì) AG490 抑制劑處理后HUVEC遷移能力的影響
        4.4.9.乳腺癌細(xì)胞源EVs對(duì) AG490 抑制劑處理后HUVEC成管能力的影響
        4.4.10.乳腺癌細(xì)胞源EVs對(duì) AG490 抑制劑處理后HUVEC相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
    4.5.討論
第五章 HUVEC-EVs對(duì)乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響
    5.1.試劑材料與儀器
        5.1.1.實(shí)驗(yàn)試劑和耗材
        5.1.2.實(shí)驗(yàn)儀器
    5.2.實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1.Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)
        5.2.2.統(tǒng)計(jì)分析
    5.3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.3.1.HUVEC-EVs對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖的影響
        5.3.2.HUVEC-EVs對(duì)乳腺癌細(xì)胞克隆形成能力的影響
        5.3.3.HUVEC-EVs對(duì)乳腺癌細(xì)胞遷移能力的影響
        5.3.4.HUVEC-EVs對(duì)乳腺癌細(xì)胞侵襲能力的影響
        5.3.5.HUVEC-EVs對(duì)乳腺癌細(xì)胞相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
    5.4.討論
第六章 主要結(jié)論與展望
    6.1.主要結(jié)論
    6.2.展望
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文、獲獎(jiǎng)及參加會(huì)議
    一、發(fā)表論文情況
    二、獲獎(jiǎng)情況
    三、參加會(huì)議情況



本文編號(hào)：3755168