本文關(guān)鍵詞：miR-101調(diào)控CRMP4基因啟動子甲基化抑制前列腺癌PC3細(xì)胞侵襲與轉(zhuǎn)移的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:課題組前期研究表明:CRMP4是新的前列腺癌轉(zhuǎn)移抑制基因;miR-101可通過下調(diào)EZH2的表達(dá),繼而上調(diào)CRMP4表達(dá),從而抑制前列腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。本研究擬探討前列腺癌PC3細(xì)胞系中miR-101對CRMP4基因啟動子區(qū)甲基化的調(diào)控作用以及miR-101上調(diào)CRMP4的表達(dá)后是否可抑制其在體外的遷移及侵襲能力。方法:采用構(gòu)建pre-miRNA-101以及siRNA EZH2質(zhì)粒,使用Lipofectamine2000分別將和轉(zhuǎn)染入PC3細(xì)胞中,同時使用可抑制EZH2組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶活性的3-Deazaneplanocin A(DZNep)處理前列腺癌PC3細(xì)胞作為對照,采用甲基化特異性PCR(Methylation specific PCR,MSP)檢測CRMP4基因在前列腺癌PC3細(xì)胞中基因啟動子甲基化狀態(tài)的變化。采用劃痕實驗及transwell評估轉(zhuǎn)染前后的細(xì)胞遷移及侵襲能力的改變。結(jié)果:構(gòu)建pre-miRNA-101以及siRNA EZH2質(zhì)粒,使用Lipofectamine2000分別將其轉(zhuǎn)染入PC3細(xì)胞中,轉(zhuǎn)染效率均大于80%,48h后real-time RT-PCR Pre-miRNA-101組和siRNA EZH2組結(jié)果均顯示:前列腺癌PC3細(xì)胞實驗組和陰性及空白對照組相對比,CRMP4 mRNA的表達(dá)水平明顯上升(P㩳0.05),EZH2 mRNA的表達(dá)水平明顯下降(P㩳0.05),而陰性對照組和空白對照組比較CRMP4、EZH2的表達(dá)量相差不大(P0.05),甲基化特異性PCR(MSP)顯示:轉(zhuǎn)染pre-miRNA-101以及siRNA EZH2質(zhì)粒及DZNEP處理的PC3細(xì)胞中CRMP4基因啟動子區(qū)甲基化程度與對照組細(xì)胞相比明顯下降(P㩳0.05),而非甲基化程度相差不大(P0.05),細(xì)胞劃痕實驗和Transwell顯示細(xì)胞的遷移和侵襲能力均明顯弱于陰性和空白對照組(P0.05)。結(jié)論:(1)miRNA-101表達(dá)上調(diào)后在前列腺癌PC3細(xì)胞中可下調(diào)EZH2的表達(dá),從而調(diào)控CRMP4基因的DNA甲基化,進(jìn)而促進(jìn)CRMP4基因轉(zhuǎn)錄,導(dǎo)致CRMP4表達(dá)上調(diào)。(2)miRNA-101可通過上調(diào)CRMP4的表達(dá)抑制前列腺癌PC3細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移。
【關(guān)鍵詞】：前列腺癌 miR-101 CRMP4甲基化
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.25
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 中英文縮略詞表9-10
• 第1章 前言10-13
• 1.1 前列腺癌流行病學(xué)10
• 1.2 表觀遺傳機(jī)制調(diào)控了前列腺癌CRMP4基因的轉(zhuǎn)錄10-11
• 1.3 miR-101調(diào)控前列腺癌CRMP4基因轉(zhuǎn)錄的探討11-13
• 第2章 實驗材料與方法13-26
• 2.1 材料13-15
• 2.1.1 主要試劑13-14
• 2.1.2 主要儀器和設(shè)備14
• 2.1.3 前列腺癌細(xì)胞系來源14-15
• 2.2 實驗方法及步驟15-25
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)15-16
• 2.2.2 轉(zhuǎn)染試劑來源16
• 2.2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染16-17
• 2.2.4 real-time RT-PCR驗證轉(zhuǎn)染效率，檢測miR-101、CRMP4、EZH2、表達(dá)量變化17-19
• 2.2.5 DZNEP藥物處理前列腺癌PC3細(xì)胞19-20
• 2.2.6 甲基化特異性PCR（MSP）20-24
• 2.2.7 電泳檢查MSP產(chǎn)物24
• 2.2.8 細(xì)胞劃痕實驗和Transwell顯示細(xì)胞的遷移和侵襲能力24-25
• 2.3 統(tǒng)計學(xué)方法25-26
• 第3章 結(jié)果26-33
• 3.1 各組細(xì)胞轉(zhuǎn)染 48h后，熒光顯微鏡下觀察PC3細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率26-27
• 3.2 轉(zhuǎn)染48h后，，real-time RT-PCR檢測轉(zhuǎn)染前后miR-101、EZH2及CRMP4表達(dá)量的變化。27-28
• 3.3 DNA提取質(zhì)量28-29
• 3.4 CRMP4啟動子基因MSP擴(kuò)增結(jié)果29-33
• 第4章 討論33-37
• 第5章 結(jié)論37-38
• 致謝38-39
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 綜述 CRMPS家族基因的相關(guān)研究進(jìn)展43-50
• 參考文獻(xiàn)48-50

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本文編號：367298