發(fā)布時間：2021-12-28 05:34

　　實驗背景:肝癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）是全世界范圍內(nèi)與癌癥相關(guān)的最常見的死亡原因之一。通常情況下,肝癌患者早期沒有明顯癥狀,被診斷時多已發(fā)展到晚期階段,已不適合手術(shù)治療。因此,晚期肝癌治療方法的選擇受到了極大的限制。此外,由于術(shù)后復(fù)發(fā)率及轉(zhuǎn)移率較高,肝癌患者的五年存活率仍然不能令人滿意。因此,認(rèn)識肝癌轉(zhuǎn)移的作用機制對肝癌的治療具有非常重要的指導(dǎo)意義。多胺是一類在哺乳動物細(xì)胞中含量豐富,參與細(xì)胞生長、分化等生理過程且發(fā)揮關(guān)鍵作用的生物小分子,包括腐胺（Putrescine,PUT）,亞精胺（Spermidine,SPD）,以及精胺（Spermine,SPM）。已有大量文獻表明腫瘤的發(fā)生發(fā)展與多胺的含量具有相關(guān)性。因此,多胺是一個十分有潛力的抗腫瘤靶點。精胺/亞精胺N¹-乙酰轉(zhuǎn)移酶（Spermidine/spermine N¹-acetyltransferase,SSAT）是真核細(xì)胞中多胺分解代謝的限速酶,是維持多胺濃度平衡的關(guān)鍵酶。但是目前SSAT在肝癌中具體的生物學(xué)功能及作用機制仍然不清楚。實驗?zāi)康?以3種... 

【文章來源】：河南大學(xué)河南省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
第二章 試劑和儀器
    2.1 一般試劑及材料
        2.1.1 細(xì)胞培養(yǎng)所需試劑
        2.1.2 細(xì)菌培養(yǎng)試劑
        2.1.3 Western blotting主要試劑
        2.1.4 高效液相色譜法主要試劑
        2.1.5 其他主要試劑及材料
    2.2 細(xì)胞株
    2.3 質(zhì)粒與siRNA
    2.4 菌株
    2.5 試劑及溶液的配制
        2.5.1 細(xì)菌培養(yǎng)主要試劑
        2.5.2 細(xì)胞培養(yǎng)主要試劑
        2.5.3 HPLC所用試劑的配制
        2.5.4 Western blotting所用試劑的配制
    2.6 主要儀器
第三章 實驗方法
    3.1 細(xì)胞株的培養(yǎng)
    3.2 質(zhì)粒、DNA的轉(zhuǎn)化及提取
    3.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗
    3.4 MTT法測定細(xì)胞生長曲線
    3.5 細(xì)胞克隆形成實驗
    3.6 傷口愈合實驗
    3.7 細(xì)胞遷移實驗
    3.8 細(xì)胞侵襲實驗
    3.9 多胺含量的測定
    3.10 蛋白的提取及濃度測定
    3.11 SDS-PAGE具體步驟
    3.12 統(tǒng)計學(xué)分析
第四章 實驗結(jié)果
    4.1 SSAT高表達(dá)以及敲減肝癌細(xì)胞株的構(gòu)建
    4.2 SSAT調(diào)控肝癌細(xì)胞中多胺含量
    4.3 SSAT調(diào)控肝癌細(xì)胞的增殖和克隆能力
    4.4 SSAT調(diào)控肝癌細(xì)胞的遷移和侵襲
    4.5 AKT通路參與SSAT對肝癌細(xì)胞的調(diào)控
    4.6 β-catenin通路參與SSAT對肝癌細(xì)胞的調(diào)控
    4.7 SSAT通過多胺含量降低調(diào)節(jié)AKT/GSK-3β/β-catenin活性
    4.8 SSAT通過AKT/GSK-3β/β-catenin通路調(diào)控肝癌細(xì)胞
結(jié)論
討論
參考文獻
附錄
致謝



本文編號：3553503