背景與目的:肺癌是全球人口中發(fā)病率最高的腫瘤性疾病,也是導(dǎo)致癌癥相關(guān)死亡的最主要原因之一。肺癌的轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致患者預(yù)后不佳的重要因素,而上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）是肺癌轉(zhuǎn)移過程中的關(guān)鍵事件。既往有許多研究報(bào)道了長鏈非編碼RNA（long noncoding RNA,lnc RNA）在包括非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）在內(nèi)的多種腫瘤中發(fā)揮重要的調(diào)控作用。本研究旨在探索lnc RNA linc00673在NSCLC中對細(xì)胞增殖、遷移、侵襲能力以及EMT過程的調(diào)控功能及其在NSCLC中的預(yù)后價(jià)值,并進(jìn)一步探索其發(fā)揮調(diào)控功能的分子機(jī)制。方法:采用CCK-8實(shí)驗(yàn)和EdU實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞的增殖能力;采用劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)分別檢測細(xì)胞的遷移能力和侵襲能力;實(shí)時(shí)熒光定量PCR被用于檢測各種RNA分子的表達(dá)水平和EMT標(biāo)志物的轉(zhuǎn)錄水平;蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)和免疫熒光實(shí)驗(yàn)被用于檢測EMT標(biāo)志物的蛋白表達(dá)情況。采用雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)檢測微小RNA（micro RNA,miRNA）與靶基... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：118 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

1各細(xì)胞系中l(wèi)inc00673的相對表達(dá)水平

浙江大學(xué)博士學(xué)位論文正文結(jié)果21為了探索linc00673在非小細(xì)胞肺癌中發(fā)揮的生物學(xué)功能，我們使用了小干擾RNA來降低細(xì)胞中l(wèi)inc00673的表達(dá)水平。在linc00673高表達(dá)的細(xì)胞系A(chǔ)549和H1975中，我們針對linc00673的序列設(shè)計(jì)了特異性靶向的siRNA來敲降其表達(dá)水平，其中si-L3和si-L5兩條siRNA干擾效率較高，在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中被繼續(xù)采用（圖3.1.2A-B）。圖3.1.2細(xì)胞內(nèi)linc00673表達(dá)水平的敲降。在（A）A549細(xì)胞和（B）H1975細(xì)胞中，使用5條siRNA敲降linc00673的表達(dá)水平，qRT-PCR檢測顯示si-L3和si-L5兩條siRNA干擾效率最佳。NC，陰性對照。***P<0.005。因?yàn)榕c正常支氣管上皮細(xì)胞相比，linc00673在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中的表達(dá)顯著上調(diào)，所以我們推測linc00673在非小細(xì)胞肺癌中或許發(fā)揮了促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用。我們首先通過CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測了linc00673對非小細(xì)胞肺癌體外增殖的影響，發(fā)現(xiàn)使用siRNA敲降A(chǔ)549和H1975兩株細(xì)胞內(nèi)linc00673的表達(dá)水平后，兩細(xì)胞系的體外增殖能力在轉(zhuǎn)染24h后就已經(jīng)受到顯著抑制（圖3.1.3A-B）；類似地，我們又在A549和H1975細(xì)胞中進(jìn)行了EdU增殖實(shí)驗(yàn)來檢測細(xì)胞的DNA復(fù)制活性，發(fā)現(xiàn)在轉(zhuǎn)染siRNA敲降linc00673表達(dá)水平的24h后，仍處于活動(dòng)增

浙江大學(xué)博士學(xué)位論文正文結(jié)果22殖中的細(xì)胞數(shù)量顯著降低（圖3.1.3C-D）。因此，我們證明了linc00673對非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的體外增殖具有重要的促進(jìn)作用。圖3.1.3Linc00673促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌體外增殖。分別使用2條siRNA敲降（A）A549和（B）H1975細(xì)胞中l(wèi)inc00673的表達(dá)水平后，CCK-8增殖實(shí)驗(yàn)顯示細(xì)胞在450nm吸光值（OD450）顯著降低，即增殖受到抑制；類似地，EdU實(shí)驗(yàn)（C-D）結(jié)果顯示在使用siRNA敲降linc00673表達(dá)水平后，DNA復(fù)制活動(dòng)水平下降，細(xì)胞增殖受到顯著抑制。EdU，標(biāo)記有復(fù)制活性的DNA分子。Hoechst，標(biāo)記細(xì)胞核。NC，陰性對照。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Knockdown of long non-coding RNA LCPAT1 inhibits autophagy in lung cancer[J]. Xiao Yu,Xiaofei Ye,Hongyan Lin,Nannan Feng,Sumeng Gao,Xiaohong Zhang,Yu Wang,Herbert Yu,Xiaobei Deng,Biyun Qian.  Cancer Biology & Medicine. 2018(03)



本文編號：3536701