目的:本研究采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（Ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS）測(cè)定人體尿液中DNA/RNA甲基化、羥甲基化修飾產(chǎn)物5-甲基-2’-脫氧胞苷（5-methyl-2’-deoxycytidine,5-mdC）、5-羥甲基-2’-脫氧胞苷（5-hydroxymethyl-2’-deoxycytidine,5-hmdC）、5-甲基胞苷（5-methylcytidine,5-mrC）和5-羥甲基胞苷（5-hydroxymethylcytidine,5-hmrC）以及RNA氧化修飾產(chǎn)物8-羥基鳥苷（8-hydroxyguanosine,8-OHG）的含量,探索其與結(jié)直腸癌（colorectal cancer,CRC）的相關(guān)性,以求尋找到一種新的早期診斷結(jié)直腸癌的無(wú)創(chuàng)性生物標(biāo)志物。方法:本研究收集了來(lái)自浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院的健康對(duì)照組尿液樣本和CRC患者尿液樣本,通過(guò)固相萃�。╯olid phase extraction,SPE）對(duì)收集到的人體尿液樣本進(jìn)行預(yù)處理... 

【文章來(lái)源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：81 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

不同流動(dòng)相添加劑條件下8-OHG的MRM質(zhì)譜圖

浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文第一章結(jié)果11圖1.2C18萃取柱和HLB萃取柱性能比較3.4分析方法的驗(yàn)證通過(guò)比較8-OHG與[13C15N2]8-OHG的峰面積比（y）與8-OHG濃度（x，nmol/L）的關(guān)系，得到了校正曲線。方程式為y=0.0319x+0.0045，在1-200.0nmol/L的濃度范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)R2=0.9999。該方法的LOQ為4.5fmol。如表1.2所示，通過(guò)測(cè)量日內(nèi)和日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relativestandarddeviation,RSD）分析了所開發(fā)方法的精密度，其值在3.5%以內(nèi)，證明UPLC-MS/MS測(cè)定方法具有極好的重復(fù)性。研究還將測(cè)定的8-OHG濃度與理論值進(jìn)行比較，得出日內(nèi)和日間測(cè)定的準(zhǔn)確度分別為98.1104.0%和98.8105.4%。在三個(gè)加標(biāo)濃度下，回收率從87.5%到107.2%不等，RSD值小于3.0%（表1.3）。通過(guò)測(cè)定10份混有內(nèi)標(biāo)的遞增尿樣溶液（1.0,2.0,5.0,10.0,20.0,50.0,100.0,150.0,200.0nmol/L），構(gòu)建校準(zhǔn)曲線，并與校正曲線的斜率比較，得到基質(zhì)效應(yīng)為89.0%。所有數(shù)據(jù)表明，所建立方法的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性是令人滿意的。

浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文第一章結(jié)果13組和64名大腸癌患者的尿液進(jìn)行了分析。8-OHG在所有尿樣中均能檢測(cè)到，且8-OHG的保留時(shí)間為3.27min，與加入的同位素內(nèi)標(biāo)[13C15N2]8-OHG一致（圖1.3）。尿Cr濃度用于對(duì)尿液中8-OHG濃度的校正，校正后的詳細(xì)濃度見(jiàn)表1.4及表1.5。圖1.3尿液樣本中8-OHG和[13C15N2]8-OHG的MRM質(zhì)譜圖表1.4健康對(duì)照組的基本信息和8-OHG濃度序號(hào)年齡(歲)性別(男:女，M:F)吸煙史(是:否，Y:N)8-OHG濃度(nmol/mmolCr)N139MN1.08±0.02N242MN1.58±0.05N337MN1.28±0.06N456MN1.80±0.09N535MN0.76±0.04N683MY1.49±0.10


本文編號(hào)：3534442