腫瘤細(xì)胞與其微環(huán)境的相互作用是腫瘤代謝重編程的一大重要特征,在影響腫瘤代謝的多種微環(huán)境中,缺氧是尤為重要的一個(gè)因素。缺氧是大部分實(shí)體瘤的共同特征,且在腫瘤代謝調(diào)控、侵襲、轉(zhuǎn)移等各個(gè)方面均發(fā)揮著重要作用。對于缺氧對腫瘤代謝調(diào)控的研究,目前在基因組和轉(zhuǎn)錄組方面已有大量研究基礎(chǔ)。缺氧會誘導(dǎo)缺氧誘導(dǎo)因子HIF的表達(dá),HIF會調(diào)控多種代謝相關(guān)的基因和酶的表達(dá)進(jìn)而影響腫瘤的代謝。而研究發(fā)現(xiàn)單純地抑制HIF介導(dǎo)的通路,有時(shí)并不能抑制腫瘤的生長,即可能存在其他非HIF依賴的調(diào)控機(jī)制。已有研究發(fā)現(xiàn)了一些非HIF調(diào)控的基因及其調(diào)控機(jī)制,特別是某些顯著變化的代謝物也會通過多種機(jī)制影響信號通路的傳導(dǎo)進(jìn)而參與缺氧應(yīng)答。因而尋找致瘤代謝物為缺氧應(yīng)答機(jī)制的研究提供了新的思路。代謝組學(xué)特別是同位素標(biāo)記代謝組學(xué),因其在代謝物及代謝通路分析方面的優(yōu)勢越來越被廣泛地應(yīng)用于腫瘤細(xì)胞代謝的研究中。目前,采用細(xì)胞代謝組學(xué)進(jìn)行腫瘤缺氧的研究大多基于細(xì)胞及分子生物學(xué)的研究基礎(chǔ)靶向地針對某一具體代謝物或者具體代謝路徑進(jìn)行下游驗(yàn)證研究,而對于整體代謝組的非靶向研究則相對較少。大量研究已表明代謝物也能參與信號通路及表觀遺傳的調(diào)控,進(jìn)而誘發(fā)... 

【文章來源】：軍事科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：151 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

樣本不同前處理方法流程圖

置于 37℃5%CO294%N2條件下培養(yǎng)。兩組均培養(yǎng) 48 小時(shí)。圖 1.1 樣本不同前處理方法流程圖1.2.2 代謝物的提取A 組細(xì)胞經(jīng)冷的 PBS 清洗三遍，加入冷的生理鹽水，采用細(xì)胞刮刀獲取細(xì)胞。1000rpm 離心 3min，獲取細(xì)胞沉淀，然后加入冷的 50%的 ACN。B 組細(xì)胞經(jīng)冷的 PBS 清洗三遍，加入冷的 80 % CH3OH/ H2O，采用細(xì)胞刮刀獲取細(xì)胞。然后兩組細(xì)胞均在冰浴條件下超聲，渦旋 1min 后，置于-20℃放置 30min；取出后冰浴條件下超聲，渦旋 1min 后，4℃ 13000 rpm 離心 20min

較為合理的細(xì)胞獲取方法是加入冷的生理鹽水或有機(jī)試劑，采用細(xì)胞刮刀細(xì)胞。較為理想的提取試劑為 80%CH3OH/H2O 和 50%ACN/H2O[45]。該部究比較了兩種方法-80% CH3OH/H2O 和 50% ACN/H2O 提取后 GC/MS 的檢果，根據(jù)總離子流色譜圖（如圖 1.3）信號響應(yīng)及檢測到的代謝物數(shù)量，發(fā)用 80% CH3OH/ H2O 進(jìn)行細(xì)胞淬滅提取得到的檢測結(jié)果更好。


本文編號：3524541