發(fā)布時間：2021-11-21 02:07

　　目的:探索乙酰肝素酶（HPSE）在肝癌侵襲遷移過程中的生物學(xué)功能影響,揭示HPSE與β-catenin/MMP7通路間潛在的機(jī)制。方法:用HPSE RNAi細(xì)胞慢病毒（Lv）轉(zhuǎn)染HepG2肝癌細(xì)胞系作為實驗細(xì)胞株;通過qRT-PCR和Western-blot技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞中HPSE的基因轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)水平。用平板克隆實驗檢測HPSE對肝癌細(xì)胞增殖的影響。用劃痕實驗和Transwell實驗檢測細(xì)胞的遷移和侵襲能力。用qRT-PCR和Western-blot檢測肝癌細(xì)胞中β-catenin、MMP7及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)因子E-cadherin、Vimentin的基因轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)。通過裸鼠成瘤體內(nèi)實驗驗證HPSE對肝癌的影響。結(jié)果:1、HPSE RNAi三組中,Lv轉(zhuǎn)染的HepG2細(xì)胞HPSE的mRNA轉(zhuǎn)錄水平均明顯低于陰性對照組（mock組）（p<0.05）;Western-blot顯示RNAi干擾組中HPSE蛋白表達(dá)明顯低于mock組。2、克隆形成實驗結(jié)果顯示:HPSE干擾組增殖率明顯低于mock組（p<0.05）。3、劃痕實驗結(jié)果顯示:HPSE干擾組劃痕距離縮短,但是與m... 

【文章來源】：皖南醫(yī)學(xué)院安徽省

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

熒光顯微鏡下觀察的HPSEmock和RNAi慢病毒轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞A：HPSEmock慢病毒轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞后（SP×200，標(biāo)記綠色熒光蛋白）

觀察鑒定慢病毒轉(zhuǎn)染是否轉(zhuǎn)染成功并保存照片。如圖 熒光顯微鏡下觀察的 HPSE mock 和 RNAi 慢病毒轉(zhuǎn)染 HepGE mock 慢病毒轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞后（SP×200，標(biāo)記綠色熒光蛋E RNAi 慢病毒轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞后（SP×400，標(biāo)記綠色熒光蛋mock和RNAi 慢病毒顆粒分別轉(zhuǎn)染 HepG2 肝癌細(xì)胞系，轉(zhuǎn)染觀察到攜帶目的基因的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株。由圖1.可知，慢病毒顆粒攜胞內(nèi)，各組細(xì)胞輪廓清晰，熒光強(qiáng)度較弱但是效果基本滿意。慢病毒干擾的 HepG2 肝癌細(xì)胞系的構(gòu)建慢病毒轉(zhuǎn)染 HepG2 細(xì)胞后，是否抑制 HPSE 基因及其 檢測 HPSE 基因轉(zhuǎn)錄情況，如圖 2.所示。

皖南醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文<0.01，***：p﹤0.001，SNQ檢驗）；其中HPSE RNAi-3組 的HepG2細(xì)胞達(dá)量低于RNAi-1、2中的表達(dá)量。estern-Blot 檢測 HPSE 蛋白的表達(dá)進(jìn)一步驗證慢病毒轉(zhuǎn)染 HepG2 細(xì)胞后，HPSE 蛋白表達(dá)是否受 Western-Blot 檢測 HPSE 蛋白表達(dá)情況，如圖 3.所示。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化在調(diào)控肝癌惡性生物學(xué)行為中的作用及其機(jī)制研究[D]. 徐志遠(yuǎn).浙江大學(xué) 2013

碩士論文
[1]肝素酶參與肝癌門靜脈瘤栓形成的組織學(xué)證據(jù)研究[D]. 岳朝輔.皖南醫(yī)學(xué)院 2015



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