研究背景原發(fā)性肝癌（HCC）是臨床上最常見的惡性腫瘤之一,發(fā)病率及死亡率在所有惡性腫瘤中均位居前列。由于起病隱匿,高度侵襲性及易出現(xiàn)轉(zhuǎn)移,確診時絕大部分患者已經(jīng)屬于晚期,失去根治性切除的時機(jī)。盡管近年來原發(fā)性肝癌治療手段有一定程度的進(jìn)展,但其長期生存仍不能令人滿意。因此深入探究原發(fā)性肝癌侵襲轉(zhuǎn)移背后的分子基礎(chǔ)至關(guān)重要。大量研究表明,持續(xù)活化的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（ERS）與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激狀態(tài)下,三種跨膜蛋白必需肌醇1α（IRE1α）,蛋白激酶RNA樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶（PERK）和活化轉(zhuǎn)錄因子-6（ATF6）激活未折疊蛋白反應(yīng)（UPR）的三條通路。其不僅可以通過修復(fù)損傷蛋白質(zhì)或降解錯誤折疊蛋白,保護(hù)腫瘤細(xì)胞避免機(jī)體殺傷,還可調(diào)控腫瘤細(xì)胞的生長,通過多種途徑促進(jìn)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移,介導(dǎo)化療耐藥。在長期持續(xù)嚴(yán)重的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激作用下,甚至可以誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡。在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激狀態(tài)下,TRIB3作為細(xì)胞應(yīng)激的傳感器表達(dá)上調(diào)。TRIB3是哺乳動物偽激酶tribbles家族的成員之一,在未折疊蛋白反應(yīng)中起著關(guān)鍵作用,它參與腫瘤的進(jìn)展,并與預(yù)后不良有關(guān)。轉(zhuǎn)錄因子Sp2（transcription facto... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

Sp2在肝癌組織中高表達(dá)A-B.免疫組化檢測Sp2在肝癌組織中過表達(dá)，在

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文31Fig2.Sp2overexpressionisassociatedwithclinicalstagingandpoorprognosis圖2Sp2過表達(dá)與腫瘤分期及不良預(yù)后有關(guān)A.Sp2表達(dá)與腫瘤TNM分期相關(guān)；B.Sp2高、低表達(dá)患者的KaplanMeier生存曲線；C.TCGA數(shù)據(jù)顯示Sp2在正常組織和肝癌組織中分別呈低表達(dá)和高表達(dá)；D.TCGA數(shù)據(jù)顯示不同Sp2表達(dá)水平(高、低表達(dá))肝癌患者的KaplanMeier生存曲線。3.2Sp2敲低抑制肝癌細(xì)胞增殖、侵襲，并促進(jìn)細(xì)胞凋亡3.2.1WesternBlot檢測三種肝癌細(xì)胞系中Sp2表達(dá)水平為了進(jìn)一步明確Sp2在肝癌中的作用，我們選取相應(yīng)肝癌細(xì)胞株進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)。采用WesternBlot方法檢測HepG2，Huh7，Hep3B三種細(xì)胞系中Sp2蛋白表達(dá)水平，結(jié)果見圖3。最終選用表達(dá)相對較高的HepG2和Huh7兩種細(xì)胞系進(jìn)行后續(xù)研究。

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文33Fig4.EffectofSp2knockdownoncellproliferationinHepG2andHuh7cells圖4敲除Sp2對肝癌細(xì)胞增殖能力的影響A.WesternBlot實(shí)驗(yàn)檢測瞬時轉(zhuǎn)染后HepG2細(xì)胞si-NC組和si-Sp2組別Sp2蛋白表達(dá)差異和統(tǒng)計圖；B.WesternBlot實(shí)驗(yàn)檢測Huh7細(xì)胞si-NC組和si-Sp2組別Sp2蛋白表達(dá)差異和統(tǒng)計圖；C.CCK8實(shí)驗(yàn)和克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測HepG2細(xì)胞si-NC組和si-Sp2組細(xì)胞增殖能力差異和統(tǒng)計圖；D.CCK8和克隆形成實(shí)驗(yàn)分別檢測Huh7細(xì)胞si-NC組和si-Sp2組細(xì)胞增殖能力差異和統(tǒng)計圖3.2.3Sp2敲低可降低肝癌細(xì)胞遷徙及侵襲能力在HepG2和Huh7兩種細(xì)胞系中，我們運(yùn)用劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞遷徙及侵襲能力的變化。劃痕實(shí)驗(yàn)表明，劃痕創(chuàng)建24小時后，對照組(si-NC)肝癌細(xì)胞遷徙范圍較Sp2轉(zhuǎn)染組（si-Sp2）明顯擴(kuò)大，提示Sp2敲除可以抑制肝癌細(xì)胞遷徙能力（圖5A-B）。而Tanswell遷徙實(shí)驗(yàn)表明，Sp2轉(zhuǎn)染組（si-Sp2）遷徙細(xì)胞比率較對照組（si-NC）明顯降低，再次證實(shí)了如上結(jié)論。同時，我們進(jìn)行了Tanswell

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號：3494201