目的:研究TNFα預處理誘導的CXC趨化因子生成耐受的機制。方法:培養(yǎng)與擴增結(jié)直腸癌HCT116細胞。建立TNFα預處理誘導結(jié)直腸癌HCT116細胞CXC趨化因子生成耐受的模型,ELISA及q RT-PCR分析上清液中CXC趨化因子的分泌及HCT116細胞中CXC趨化因子m RNA的表達。RT-PCR及FACS檢測TNFα對HCT116細胞TNFR1、TNFR2表達的影響。q RT-PCR及Western blot分析檢測MAPKs及NFκB通路活化與CXC趨化因子的產(chǎn)生的關(guān)系。q RT-PCR及Western blot分析檢測TNFα對A20表達的影響。用A20過表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HCT116細胞并用Western blot分析檢測A20過表達對TNFα誘導趨化因子生成的影響。在si RNA抑制HCT116細胞A20表達后,用q RT-PCR檢測TNFα預處理誘導趨化因子生成耐受的情況。結(jié)果:1.TNFα預處理誘導HCT116細胞中CXC趨化因子生成出現(xiàn)耐受。2.TNFα不影響HCT116細胞TNF受體的表達。3.TNFα通過ERK信號通路誘導HCT116細胞CXC趨化因子生成。4.TNF... 

【文章來源】：南華大學湖南省

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

CXCL8mRNA的熒光定量PCR的擴增曲線圖、熔解曲線圖

與對照組相比，P <0.05比，P <0.05。2. TNFα對 TNF 受體表達的影響了闡明 TNFα誘導的趨化因子產(chǎn)生的負調(diào)控機制，我們檢測了 TN TNF 受體 1（TNFR1）和 2（TNFR2）表達的影響。 RT-PCR 結(jié)果 20ng / ml 的 TNFα處理 HCT116 細胞 1h 后，各組的 HCT116 細平的 TNFR1，但不表達 TNFR2（圖 4A-4B）。RT-PCR 結(jié)果顯示 T調(diào)控 TNFR1 和 TNFR2 的 mRNA 表達水平（圖 4A）。用 20ng / ml HCT116 細胞不同時間段（1-24 小時），RT-PCR 結(jié)果顯示 TNFα不 TNFR2 的 mRNA 表達水平（圖 4B）。TNFR1TNFα(ng/ml)0 .5 1 5 10 20arkerMATNFα (h)0 1 3 6 12 24arkerMTNBre-T 0 0 1 5 20 20e-T 0 20 20 20 20 0TNFα (ng/ml)

TNFα誘導MAPKs及NF-κB活化


本文編號：3476218