結(jié)直腸癌（colorectal cancer,CRC）是世界范圍內(nèi)的第三大腫瘤,近年其發(fā)病率在我國有逐漸上升的趨勢。O-糖基化的改變是腫瘤性疾病的特征性事件之一,并與腫瘤的細(xì)胞間信號(hào)傳導(dǎo)、免疫逃避等眾多過程相關(guān)。多肽N-乙酰氨基半乳糖基轉(zhuǎn)移酶（ppGalNAc-Ts）是催化細(xì)胞內(nèi)黏蛋白型O-糖基化起始的關(guān)鍵酶,在多種腫瘤中均發(fā)現(xiàn)了其的異常上調(diào)/下調(diào)表達(dá)。然而,目前我們對O-糖基化及與之相關(guān)的糖基轉(zhuǎn)移酶在結(jié)直腸癌中的功能機(jī)制仍然知之甚少。ppGalNAc-T4是ppGalNAc-Ts的家族成員之一,其在消化道正常粘膜及結(jié)直腸癌中均有相對高水平的表達(dá),但其在結(jié)直腸癌中的具體功能機(jī)制尚未見報(bào)道。在本項(xiàng)研究中,我們首先利用結(jié)腸癌的ppGalNAc-T4敲低/過表達(dá)細(xì)胞株對腫瘤行為學(xué)等表型進(jìn)行分析,結(jié)果表明,ppGalNAc-T4并不影響腫瘤增殖,但促進(jìn)細(xì)胞的成瘤和集落形成能力;其缺失將導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)“類EMT樣改變”和侵襲遷移能力的增強(qiáng)。反映了ppGalNAc-T4在腫瘤細(xì)胞不同生物學(xué)行為中多樣的功能。隨后,我們檢測了臨床樣本中ppGalNAc-T4的表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)其在結(jié)直腸癌疾病進(jìn)程中呈現(xiàn)“動(dòng)... 

【文章來源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

ppGalNAc-T4在正常組織中的表達(dá)情況（RNA水平）

上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文的 ppGalNAc-T12 在內(nèi)的其他 ppGalNAc-Ts 均未見表達(dá)信號(hào)，或表達(dá)較弱果表明，本課題所采用的 ppGalNAc-T4 的抗體具有較好的特異性。2.3.2 構(gòu)建 ppGalNAc-T4 過表達(dá)/敲低的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株2.3.2.1 各結(jié)腸癌細(xì)胞系中 ppGalNAc-T4 的表達(dá)情況為了研究 ppGalNAc-T4 參與 CRC 疾病進(jìn)程的具體機(jī)制，我們選取了的結(jié)腸癌細(xì)胞（SW480，SW620，HCT116，RKO，HT29），分別采用 We和 qPCR 的方法檢驗(yàn)不同結(jié)腸癌細(xì)胞株中 ppGalNAc-T4 的表達(dá)水平，結(jié)ppGalNAc-T4 在 SW480 和 HT29 細(xì)胞系中表達(dá)較高，而在 SW620、HCT1三株細(xì)胞系中表達(dá)較低（圖 2-4）。由于這 5 株細(xì)胞系的增殖、遷移、侵襲近相同，因?yàn)槲覀儾聹y ppGalNAc-T4 可能參與調(diào)控了結(jié)腸癌細(xì)胞的行為與A B

29圖 2-5: ppGalNAc-T4 敲低效率驗(yàn)證Figure 2-5: ppGalNAc-T4 was knockdown in SW480 and HT29 cell linesA: Western Blot 驗(yàn)證 SW480 中的敲低效率B: Lectin Blot 驗(yàn)證 SW480 敲低細(xì)胞系中糖基化水平變化C: Western Blot 驗(yàn)證 HT29 中的敲低效率D: Lectin Blot 驗(yàn)證 HT29 敲低細(xì)胞系中糖基化水平變化

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Prognostic and predictive response factors in colorectal cancer patients:Between hope and reality[J]. Chiara De Divitiis,Guglielmo Nasti,Massimo Montano,Rossella Fisichella,Rosario Vincenzo Iaffaioli,Massimiliano Berretta.  World Journal of Gastroenterology. 2014(41)
[2]Genetic and epigenetic biomarkers for diagnosis, prognosis and treatment of colorectal cancer[J]. Fabio Coppedè,Angela Lopomo,Roberto Spisni,Lucia Migliore.  World Journal of Gastroenterology. 2014(04)



本文編號(hào)：3469451