背景:結(jié)直腸癌（colorectal cancer,CRC）是一種在全世界范圍內(nèi)高發(fā)的惡性腫瘤,對人們的健康產(chǎn)生了嚴(yán)重的危害。與大多數(shù)實體瘤類似,CRC的分子發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜,其中APC、TP53等重要抑癌基因的失活是其發(fā)病的重要基礎(chǔ)。因此深入研究并闡明抑癌基因的表達(dá)調(diào)控對正確理解、認(rèn)識CRC的發(fā)病機(jī)理具有重要的意義。最近,我們利用全外顯子組測序及功能實驗,首次報道抑癌基因RASSF6（Ras-association domain family number 6）的表達(dá)缺失或下調(diào)參與CRC的發(fā)生、發(fā)展。Micro RNA,作為一種調(diào)控m RNA表達(dá)水平的短序列非編碼RNA受到越來越多的重視。我們前期利用生物信息學(xué)方法分析確定RASSF6上游CRC新致癌miRNA（miR-496）。就我們掌握的文獻(xiàn),到目前為止,系統(tǒng)分析RASSF6上游miRNAs的靶向調(diào)控以及miR-496在CRC發(fā)生、發(fā)展中的分子作用機(jī)制還未見報道。因此,本研究的完成有助于我們進(jìn)一步認(rèn)知CRC發(fā)生、發(fā)展過程中RASSF6的表達(dá)調(diào)控網(wǎng)絡(luò),明確新致癌基因miR-496的作用機(jī)制,具有重要的理論意義。研究方法:1、利用mi... 

【文章來源】：西北大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

LoVo、SW480細(xì)胞生長狀

西北大學(xué)碩士學(xué)位論文10女性樣本，年齡范圍在44歲到81歲之間，每位患者（無家族病史）均具有完整的臨床病理資料。我們選取結(jié)直腸癌細(xì)胞系中的人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞LoVo和SW480細(xì)胞系用于本章的研究，以上兩個細(xì)胞系均購自廣州吉尼歐生物科技有限公司，細(xì)胞無污染、狀態(tài)良好，生長狀態(tài)如圖1所示。LoVoSW480圖1LoVo、SW480細(xì)胞生長狀態(tài)（圖片源于ATCC）2.1.3實驗儀器表1主要儀器及廠商儀器生產(chǎn)廠家超低溫冰箱TOMOS公司CO2培養(yǎng)箱日本三洋公司高性能臺式離心機(jī)美國Thermo公司低速離心機(jī)北京鼎國生物技術(shù)公司微量移液器德國Eppendorf公司超凈工作臺蘇州蘇潔凈化公司AF-100AS制冰機(jī)常熟市雪科有限公司化學(xué)發(fā)光儀美國Thermo公司手掌式微型離心機(jī)杭州瑞誠儀器有限公司數(shù)顯恒溫水浴鍋北京鼎國生物技術(shù)公司金屬浴美國TOMOS公司CFX96實時定量熒光PCR儀美國伯樂公司酶標(biāo)儀美國Thermo公司電子天平德國賽多利斯漩渦混合儀北京東林昌盛生物科技有限公司

第二章RASSF6上游miRNA的篩選及miR-496的確定23圖2RASSF6上游miRNA篩選示意圖表1015個miRNAs的mirSVRscore和PhastConsscore評分情況miRNAmirSVRscoremirSVR排序PhastConsscorehsa-miR-448-1.107410.6290hsa-miR-496-1.017620.5159hsa-miR-653-0.917030.6232hsa-miR-223-0.914740.5525hsa-miR-203a-0.843150.5587hsa-miR-216a-0.813460.5366hsa-miR-217-0.769370.5366hsa-miR-181c-0.763580.6223hsa-miR-876-5p-0.761690.6209hsa-miR-181a-0.7598100.6223hsa-miR-181b-0.7598110.6223hsa-miR-181d-0.7561120.6223hsa-miR-203a-0.7297130.5665hsa-miR-590-3p-0.6636140.6232hsa-miR-590-5p-0.6174150.6869hsa-miR-21-0.6100160.6869注：hsa-miR-203有兩個不同的RASSF6靶向結(jié)合位點(diǎn)。因為所選miRNAs靶向調(diào)節(jié)RASSF6，RASSF6是一個抑癌基因，在CRC中低表達(dá)，故我們通過TCGA數(shù)據(jù)庫下載篩選出來的15個miRNA及RASSF6在正常及CRC組織中的表達(dá)值及相應(yīng)患者臨床病理信息，進(jìn)一步篩選出其中表達(dá)上調(diào)的miRNAs，結(jié)果如圖3所示，與正常組織相比，有10個miRNA在CRC中表達(dá)上調(diào)。繼續(xù)用GraphPad軟件分

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Low RASSF6 expression in pancreatic ductal adenocarcinoma is associated with poor survival[J]. Hui-Lin Ye,Dou-Dou Li,Qing Lin,Yu Zhou,Quan-Bo Zhou,Bing Zeng,Zhi-Qiang Fu,Wen-Chao Gao,Yi-Min Liu,Rui-Wan Chen,Zhi-Hua Li,Ru-Fu Chen.  World Journal of Gastroenterology. 2015(21)
[2]Current treatment for colorectal liver metastases[J]. Evangelos P Misiakos,Nikolaos P Karidis,Gregory Kouraklis.  World Journal of Gastroenterology. 2011(36)



本文編號：3459466