研究背景DAB2IP（DOC-2/DAB2 interactive protein）基因是一個新發(fā)現(xiàn)的抑癌基因,與許多腫瘤都息息相關。近來許多研究人員發(fā)現(xiàn),DAB2IP在多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展的過程中出現(xiàn)表達下調(diào)或缺失,例如在前列腺癌、乳腺癌、結直腸癌、肺癌等。DAB2IP在這些腫瘤中研究的不斷深入,但在食管癌中的表達和作用尚不清楚。研究目的探討DAB2IP在食管癌中的表達水平和是否對食管癌的放療敏感性發(fā)揮作用。研究方法通過Western Blot檢測正常食管和食管癌中的DAB2IP表達情況。構建Kyse150穩(wěn)轉過表達細胞株Kyse150-DAB2IP和對照組Kyse150-vector,和EC109穩(wěn)定敲除細胞株對照組EC109-shluc和敲除組EC109-sh DAB2IP。通過流式細胞術測凋亡檢測EC109-shluc和EC109-sh DAB2IP對輻射后凋亡的影響。對EC109-shluc和EC109-sh DAB2IP的細胞進行輻射處理,再進行免疫熒光共聚焦實驗檢測53BP1和γ-H2AX的表達,對比DAB2IP是否對放療引起的損傷有影響。建立Kyse150裸鼠移植瘤模型,... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學安徽省

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

用WB評估正常和腫瘤細胞中DAB2IP的蛋白表達水平

安徽醫(yī)科大學碩士學位論文21圖1.用WB評估正常和腫瘤細胞中DAB2IP的蛋白表達水平。N1、N2為正常食管細胞，TE1、EC109、Kyse150、Kyse30分別為食管癌細胞株。Fig1.TheexpressionofDAB2IPassessedbyWesternBoltinnormalandtumorcells.N1andN2arenormalesophagealcells,andTE1,EC109,Kyse150,andKyse30areesophagealcancercelllines.圖2.左邊為Kyse150穩(wěn)轉細胞株對照組和過表達組的蛋白表達水平，右邊為EC109細胞株敲除對照組和DAB2IP的正常表達組的蛋白表達情況。Fig2.TheleftsideshowstheproteinexpressionoftheKyse150stablecelllinecontrolgroupandtheoverexpressiongroup,andtherightsideshowstheproteinexpressionoftheEC109celllineknockoutcontrolgroupandthenomoralexpressiongroupofDAB2IP.

安徽醫(yī)科大學碩士學位論文224.2DAB2IP的表達下調(diào)導致輻射引起的凋亡減少為了探究DAB2IP表達與放療敏感性的關系，我們利用Annexin-V/PI雙染法分析輻射引起的凋亡和DAB2IP的關系。如圖3所示與相應的對照組EC109-shluc細胞相比，凋亡細胞減少（32.360±5.210％vs17.890±4.65％，P=0.02）。結果顯示DAB2IP的表達下調(diào)，輻射引起凋亡減少，DAB2IP的表達與輻射的放療敏感性呈正相關。圖3.將EC109-shluc和EC109-shDAB2IP做2Gy輻射和不做輻射處理，將48h收集到的細胞進行Annexin-V/PI雙染法檢測流式結果。Fig3.EC109-shlucandEC109-shDAB2IPwereirradiatedwith2Gyandwithoutradiationtreatment,thecellscollectedat48handAnnexinV/PI-stainedcellswereanalysedbyflowcytometry.4.3DAB2IP的表達下調(diào)增加了DNA的損傷修復眾所周知，細胞的放療敏感性與DSB的修復能力密切相關,而DSB的修復能力涉及γH2AX的快速磷酸化和DNA損傷中特異性位點P53結合蛋白（53BP1）的募集。在免疫熒光共聚焦中γH2AX和53BP1在DNA雙鏈斷裂處表現(xiàn)為離散的聚焦點，用于檢測DNA損傷修復的狀態(tài)。對EC109-shluc和EC109-shDAB2IP做輻射處理和不輻射處理，36h進行53BP1（紅色）和磷酸化-γH2AX（綠色）雙重免疫熒光染色，通過對聚焦點（黃色）的共定位計數(shù)來確定DSB損傷修復的情況。結果顯示DAB2IP在EC109細胞的表達下調(diào)，導致DNA損傷減少，修復增加（p<0.05）。


本文編號：3458802