研究背景DAB2IP（DOC-2/DAB2 interactive protein）基因是一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的抑癌基因,與許多腫瘤都息息相關(guān)。近來許多研究人員發(fā)現(xiàn),DAB2IP在多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展的過程中出現(xiàn)表達(dá)下調(diào)或缺失,例如在前列腺癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌、肺癌等。DAB2IP在這些腫瘤中研究的不斷深入,但在食管癌中的表達(dá)和作用尚不清楚。研究目的探討DAB2IP在食管癌中的表達(dá)水平和是否對(duì)食管癌的放療敏感性發(fā)揮作用。研究方法通過Western Blot檢測(cè)正常食管和食管癌中的DAB2IP表達(dá)情況。構(gòu)建Kyse150穩(wěn)轉(zhuǎn)過表達(dá)細(xì)胞株Kyse150-DAB2IP和對(duì)照組Kyse150-vector,和EC109穩(wěn)定敲除細(xì)胞株對(duì)照組EC109-shluc和敲除組EC109-sh DAB2IP。通過流式細(xì)胞術(shù)測(cè)凋亡檢測(cè)EC109-shluc和EC109-sh DAB2IP對(duì)輻射后凋亡的影響。對(duì)EC109-shluc和EC109-sh DAB2IP的細(xì)胞進(jìn)行輻射處理,再進(jìn)行免疫熒光共聚焦實(shí)驗(yàn)檢測(cè)53BP1和γ-H2AX的表達(dá),對(duì)比DAB2IP是否對(duì)放療引起的損傷有影響。建立Kyse150裸鼠移植瘤模型,... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

用WB評(píng)估正常和腫瘤細(xì)胞中DAB2IP的蛋白表達(dá)水平

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文21圖1.用WB評(píng)估正常和腫瘤細(xì)胞中DAB2IP的蛋白表達(dá)水平。N1、N2為正常食管細(xì)胞，TE1、EC109、Kyse150、Kyse30分別為食管癌細(xì)胞株。Fig1.TheexpressionofDAB2IPassessedbyWesternBoltinnormalandtumorcells.N1andN2arenormalesophagealcells,andTE1,EC109,Kyse150,andKyse30areesophagealcancercelllines.圖2.左邊為Kyse150穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株對(duì)照組和過表達(dá)組的蛋白表達(dá)水平，右邊為EC109細(xì)胞株敲除對(duì)照組和DAB2IP的正常表達(dá)組的蛋白表達(dá)情況。Fig2.TheleftsideshowstheproteinexpressionoftheKyse150stablecelllinecontrolgroupandtheoverexpressiongroup,andtherightsideshowstheproteinexpressionoftheEC109celllineknockoutcontrolgroupandthenomoralexpressiongroupofDAB2IP.

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文224.2DAB2IP的表達(dá)下調(diào)導(dǎo)致輻射引起的凋亡減少為了探究DAB2IP表達(dá)與放療敏感性的關(guān)系，我們利用Annexin-V/PI雙染法分析輻射引起的凋亡和DAB2IP的關(guān)系。如圖3所示與相應(yīng)的對(duì)照組EC109-shluc細(xì)胞相比，凋亡細(xì)胞減少（32.360±5.210％vs17.890±4.65％，P=0.02）。結(jié)果顯示DAB2IP的表達(dá)下調(diào)，輻射引起凋亡減少，DAB2IP的表達(dá)與輻射的放療敏感性呈正相關(guān)。圖3.將EC109-shluc和EC109-shDAB2IP做2Gy輻射和不做輻射處理，將48h收集到的細(xì)胞進(jìn)行Annexin-V/PI雙染法檢測(cè)流式結(jié)果。Fig3.EC109-shlucandEC109-shDAB2IPwereirradiatedwith2Gyandwithoutradiationtreatment,thecellscollectedat48handAnnexinV/PI-stainedcellswereanalysedbyflowcytometry.4.3DAB2IP的表達(dá)下調(diào)增加了DNA的損傷修復(fù)眾所周知，細(xì)胞的放療敏感性與DSB的修復(fù)能力密切相關(guān),而DSB的修復(fù)能力涉及γH2AX的快速磷酸化和DNA損傷中特異性位點(diǎn)P53結(jié)合蛋白（53BP1）的募集。在免疫熒光共聚焦中γH2AX和53BP1在DNA雙鏈斷裂處表現(xiàn)為離散的聚焦點(diǎn)，用于檢測(cè)DNA損傷修復(fù)的狀態(tài)。對(duì)EC109-shluc和EC109-shDAB2IP做輻射處理和不輻射處理，36h進(jìn)行53BP1（紅色）和磷酸化-γH2AX（綠色）雙重免疫熒光染色，通過對(duì)聚焦點(diǎn)（黃色）的共定位計(jì)數(shù)來確定DSB損傷修復(fù)的情況。結(jié)果顯示DAB2IP在EC109細(xì)胞的表達(dá)下調(diào)，導(dǎo)致DNA損傷減少，修復(fù)增加（p<0.05）。


本文編號(hào)：3458802