目的:由于其組織固有特性,2型固有淋巴細(xì)胞（ILC2）的功能隨組織微環(huán)境不同而改變。大量研究已經(jīng)闡明了ILC2在多種炎癥過程中的作用,但是它們在肝癌中的作用仍然未知。在這里,我們鑒定了肝癌微環(huán)境誘導(dǎo)的一群非經(jīng)典ILC2,并分析研究其對肝癌微環(huán)境的影響。材料與方法:我們從肝癌患者（n=150）中收集配對的肝癌和癌旁組織以及一些外周血和門靜脈血樣,從肝血管瘤肝切患者（n=20）中收集正常肝臟組織。通過流式細(xì)胞術(shù),質(zhì)譜流式,免疫熒光,免疫印跡,RNA轉(zhuǎn)錄組測序（來自分選的肝臟ILC2）檢測病人肝臟組織中的ILC2,并分析其與患者生存預(yù)后的關(guān)系。將癌基因質(zhì)粒與轉(zhuǎn)座酶質(zhì)粒一起通過小鼠尾靜脈進(jìn)行水動力高壓注射（HDI）來建立小鼠原位肝癌模型。通過尾靜脈給腫瘤負(fù)荷的小鼠注射分離的原代ILC2或PBS。為了研究ILC2的組織駐留或循環(huán)特性,給小鼠尾靜脈內(nèi)注射PE染料結(jié)合的抗CD45流式抗體來實(shí)現(xiàn)血管內(nèi)染色。通過腹腔內(nèi)給予溴脫氧尿苷（Brd U）,對肝臟內(nèi)ILC2進(jìn)行Brd U的測定來觀察ILC2在體內(nèi)的增殖情況。通過質(zhì)粒構(gòu)建、病毒感染對小鼠ILC2進(jìn)行KLRG1和CXCL2基因的敲除或過表達(dá)后體外實(shí)驗(yàn)... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：129 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

肝癌及癌旁組織中ILC2的表型鑒定

圖1.1肝癌及癌旁組織中ILC2的表型鑒定(A)用細(xì)胞表面標(biāo)記鑒定人肝臟組織中ILC2以及流式分析的圈門方法;其中Lineage抗體包括CD3,CD19,CD20,CD11b,CD11c,CD235a,CD14,CD16,CD34,CD123 and CD94。(B)腫瘤與癌旁組織的取材示意圖,癌旁組織的取材距離腫瘤邊緣2cm以上;并用轉(zhuǎn)錄因子GATA3驗(yàn)證了肝癌及癌旁肝癌中鑒定的ILC2。(C)肝癌和癌旁質(zhì)譜流式結(jié)果(上一級圈門為CD45+LIN-CD127+)展示了用于鑒定ILC2的一系列表面分子和轉(zhuǎn)錄因子。

因?yàn)镮LC是一群高度異質(zhì)性細(xì)胞,在不同的微環(huán)境中所發(fā)揮的功能不一樣,其相應(yīng)的表型也有所改變。從炎癥到癌癥,肝癌的微環(huán)境相比于癌旁表現(xiàn)出明顯的不同。在檢測到肝癌及癌旁ILC2后,我們進(jìn)一步驗(yàn)證了肝癌及癌旁中ILC2的其他功能性細(xì)胞表面分子以及組織信號受體的表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)來自肝癌組織中的ILC2的表面分子KLRG1相比于癌旁的ILC2明顯下調(diào)(圖1.2A)。為了明確這一發(fā)現(xiàn),我們檢測了15對肝癌和癌旁標(biāo)本以及8例肝癌病人外周血來源的ILC2中的KLRG1表達(dá),發(fā)現(xiàn)肝癌組織中KLRG1-的ILC2的比例顯著高于癌旁及外周血ILC2(圖1.2B)。另外,鑒于IL-33、IL-25和TSLP是ILC2的主要激活因子,其相應(yīng)的受體分別是ST2、IL17RB和TSLPR,而且有相關(guān)研究報(bào)道在其他疾病如肺部炎癥、過敏性皮膚炎中的ILC2表達(dá)這些受體,我們對肝癌和癌旁組織中的ILC2進(jìn)行了這些受體蛋白的檢測,發(fā)現(xiàn)肝癌及癌旁中,只有少量的ILC2表達(dá)ST2和TSLPR,而兩者幾乎均不表達(dá)IL17RB(圖1.2C)。同樣地,我們統(tǒng)計(jì)了幾例配對樣本中ILC2的ST2(n=10)、IL17RB(n=11)和TSLPR(n=8)的表達(dá)情況。我們發(fā)現(xiàn)外周血中ILC2的ST2和TSLPR的平均表達(dá)量高于肝組織中的ILC2(圖1.2D)。圖1.2肝癌和癌旁組織中ILC2的異質(zhì)性

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Role of innate immunity in the development of hepatocellular carcinoma[J]. Rajagopal N Aravalli.  World Journal of Gastroenterology. 2013(43)
[2]Liver tumor infiltrating lymphocytes: Comparison of hepatocellular and cholangiolar carcinoma[J]. Hans-Udo Kasper,Uta Drebber,Dirk Ludger Stippel,Hans Peter Dienes,Anton Gillessen.  World Journal of Gastroenterology. 2009(40)



本文編號：3442964