目的胃癌是在胃黏膜上皮發(fā)現(xiàn)的惡性腫瘤,其病死率居世界第二位。近年來對胃癌的研究有了重要進(jìn)展,但是對于其早期診斷及發(fā)病機(jī)制仍未完全了解。Parkin是一種E3泛素連接酶,已經(jīng)顯示在多種癌癥中起著抑癌基因的作用,包括胃癌。然而,Parkin在癌癥中的作用機(jī)制尚不清楚。本研究,我們將進(jìn)一步探討Parkin在胃癌組織中的表達(dá)情況、Parkin在胃癌細(xì)胞增殖、遷移、凋亡中的作用及其作用機(jī)制。通過本項(xiàng)目的研究期望為胃癌的診斷、治療提出新的靶點(diǎn)。方法分別通過實(shí)時(shí)定量PCR和蛋白質(zhì)免疫印跡檢測Parkin在胃癌組織樣本和不同胃癌細(xì)胞系中的表達(dá)水平;通過流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡;MTT比色法檢測細(xì)胞活性;細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞遷移;構(gòu)建Parkin基因啟動子熒光素酶報(bào)告基因載體,檢測熒光素酶活性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證FOXO3a和Parkin基因啟動子的結(jié)合;通過免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證Parkin與ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白E1（ATP binding cassette transporter E1,ABCE1）的結(jié)合。結(jié)果在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)Parkin在患者胃癌組織及胃癌細(xì)胞系中均表達(dá)下調(diào),當(dāng)Parki... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
材料與方法
    1.實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備
    2.實(shí)驗(yàn)耗材與試劑
    3.臨床組織樣本
    4.細(xì)胞培養(yǎng)
    5.siRNA合成
    6.腺病毒構(gòu)建
    7.質(zhì)粒的構(gòu)建與提取
    8.轉(zhuǎn)染
    9.組織RNA提取
    10.實(shí)時(shí)定量PCR
    11.蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)
    12.細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)
    13.檢測細(xì)胞活性:MTT(四甲基偶氮唑鹽)實(shí)驗(yàn)
    14.檢測細(xì)胞遷移:Transwell實(shí)驗(yàn)
    15.細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)
    16.免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,co-IP):蛋白質(zhì)相互作用
    17.染色質(zhì)免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation, CHIP)
    18.熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)
    19.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
結(jié)果
    1.Parkin在胃癌組織和胃癌細(xì)胞系中低表達(dá)
    2.Parkin抑制胃癌細(xì)胞的增殖,遷移和侵襲
    3.Parkin通過促進(jìn)DOX誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡來增加胃癌細(xì)胞對化療藥物的敏感性
    4.Parkin直接靶向ABCE1
    5.ABCE1促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖和遷移,抑制胃癌細(xì)胞凋亡
    6.FOXO3a轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)Parkin基因的表達(dá)
    7.FOXO3a抑制胃癌細(xì)胞增殖和遷移,促進(jìn)凋亡,并增強(qiáng)胃癌對化療藥物的敏感性
    8.Parkin通過FOXO3a和 ABCE1 抑制胃癌的發(fā)展
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
縮略詞表
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Recent advances in gastric cancer early diagnosis[J]. Laura Necula,Lilia Matei,Denisa Dragu,Ana I Neagu,Cristina Mambet,Saviana Nedeianu,Coralia Bleotu,Carmen C Diaconu,Mihaela Chivu-Economescu.  World Journal of Gastroenterology. 2019(17)
[2]超級增強(qiáng)子在腫瘤研究中的進(jìn)展[J]. 吳志強(qiáng),米澤云.  遺傳. 2019(01)
[3]miR-34a mediates oxaliplatin resistance of colorectal cancer cells by inhibiting macroautophagy via transforming growth factor-β/Smad4 pathway[J]. Chen Sun,Fu-Jing Wang,Hao-Gang Zhang,Xun-Zheng Xu,Rui-Chun Jia,Lei Yao,Peng-Fei Qiao.  World Journal of Gastroenterology. 2017(10)
[4]ABCE1基因沉默對人膀胱癌T24細(xì)胞增殖和遷移能力的影響[J]. 李強(qiáng),王九江,羅水發(fā),朱俊杰.  中國病理生理雜志. 2015(05)



本文編號：3434280