發(fā)布時間：2021-10-13 08:09

　　目的胃癌是在胃黏膜上皮發(fā)現的惡性腫瘤,其病死率居世界第二位。近年來對胃癌的研究有了重要進展,但是對于其早期診斷及發(fā)病機制仍未完全了解。Parkin是一種E3泛素連接酶,已經顯示在多種癌癥中起著抑癌基因的作用,包括胃癌。然而,Parkin在癌癥中的作用機制尚不清楚。本研究,我們將進一步探討Parkin在胃癌組織中的表達情況、Parkin在胃癌細胞增殖、遷移、凋亡中的作用及其作用機制。通過本項目的研究期望為胃癌的診斷、治療提出新的靶點。方法分別通過實時定量PCR和蛋白質免疫印跡檢測Parkin在胃癌組織樣本和不同胃癌細胞系中的表達水平;通過流式細胞術檢測細胞凋亡;MTT比色法檢測細胞活性;細胞劃痕實驗和Transwell實驗檢測細胞遷移;構建Parkin基因啟動子熒光素酶報告基因載體,檢測熒光素酶活性實驗驗證FOXO3a和Parkin基因啟動子的結合;通過免疫共沉淀實驗驗證Parkin與ATP結合盒轉運蛋白E1（ATP binding cassette transporter E1,ABCE1）的結合。結果在本研究中,我們發(fā)現Parkin在患者胃癌組織及胃癌細胞系中均表達下調,當Parki... 

【文章來源】：青島大學山東省

【文章頁數】：60 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
材料與方法
    1.實驗儀器與設備
    2.實驗耗材與試劑
    3.臨床組織樣本
    4.細胞培養(yǎng)
    5.siRNA合成
    6.腺病毒構建
    7.質粒的構建與提取
    8.轉染
    9.組織RNA提取
    10.實時定量PCR
    11.蛋白免疫印跡實驗
    12.細胞劃痕實驗
    13.檢測細胞活性:MTT(四甲基偶氮唑鹽)實驗
    14.檢測細胞遷移:Transwell實驗
    15.細胞凋亡實驗
    16.免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,co-IP):蛋白質相互作用
    17.染色質免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation, CHIP)
    18.熒光素酶報告基因實驗
    19.統計學方法
結果
    1.Parkin在胃癌組織和胃癌細胞系中低表達
    2.Parkin抑制胃癌細胞的增殖,遷移和侵襲
    3.Parkin通過促進DOX誘導的細胞凋亡來增加胃癌細胞對化療藥物的敏感性
    4.Parkin直接靶向ABCE1
    5.ABCE1促進胃癌細胞的增殖和遷移,抑制胃癌細胞凋亡
    6.FOXO3a轉錄調節(jié)Parkin基因的表達
    7.FOXO3a抑制胃癌細胞增殖和遷移,促進凋亡,并增強胃癌對化療藥物的敏感性
    8.Parkin通過FOXO3a和 ABCE1 抑制胃癌的發(fā)展
討論
結論
參考文獻
綜述
    綜述參考文獻
攻讀學位期間的研究成果
縮略詞表
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Recent advances in gastric cancer early diagnosis[J]. Laura Necula,Lilia Matei,Denisa Dragu,Ana I Neagu,Cristina Mambet,Saviana Nedeianu,Coralia Bleotu,Carmen C Diaconu,Mihaela Chivu-Economescu.  World Journal of Gastroenterology. 2019(17)
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[3]miR-34a mediates oxaliplatin resistance of colorectal cancer cells by inhibiting macroautophagy via transforming growth factor-β/Smad4 pathway[J]. Chen Sun,Fu-Jing Wang,Hao-Gang Zhang,Xun-Zheng Xu,Rui-Chun Jia,Lei Yao,Peng-Fei Qiao.  World Journal of Gastroenterology. 2017(10)
[4]ABCE1基因沉默對人膀胱癌T24細胞增殖和遷移能力的影響[J]. 李強,王九江,羅水發(fā),朱俊杰.  中國病理生理雜志. 2015(05)



本文編號：3434280