目的:頭頸鱗狀細胞癌的發(fā)病率為癌癥中的第六名,且在發(fā)展中國家趨于逐年攀升。舌鱗狀細胞癌（TSCC）是最常見的頭頸鱗狀細胞癌,其特點是增殖率高,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高,發(fā)病率逐年遞增,且發(fā)病人群朝向年輕化和女性化發(fā)展。回顧過去,盡管手術(shù)、放療和化療等治療手段的發(fā)展日新月異,但舌鱗癌晚期患者的預(yù)后仍不盡如人意,主要的致命原因為局部復(fù)發(fā)以及遠處轉(zhuǎn)移。近年來分子靶向治療成為腫瘤綜合治療的研究熱點,為腫瘤的治療提供了新途徑。因此,尋找高效特異、毒副作用小的治療靶點具有積極的臨床意義。長鏈非編碼RNA（LncRNA）DANCR因維持表皮細胞干性被首次報道。研究發(fā)現(xiàn),LncRNA DANCR能夠促進前列腺癌、胃癌、結(jié)腸癌等惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移;然而,其生物學(xué)作用及其在TSCC進展中的潛在機制尚未得到明確的闡述。本研究采用體內(nèi)、外實驗來探尋DANCR對TSCC的作用及其分子機制,為揭示腫瘤的惡性生物學(xué)特性以及舌鱗癌的治療提供新見解、新方向。方法:1.在四種TSCC細胞系中（SCC9、TSCCA、TCa-8113、CAL-27）沉默或過表達DANCR后,通過MTT、劃痕及Transwell實驗,來觀察DANCR... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：96 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 :DANCR在 TSCC中的表達及生物學(xué)功能
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 實驗試劑
            2.1.2 實驗儀器
        2.2 實驗方法
            2.2.1 TSCC細胞復(fù)蘇、培養(yǎng)、計數(shù)、傳代和凍存
            2.2.2 qRT-PCR檢測TSCC細胞中LncRNA DANCR的相對表達量
            2.2.3 si-DANCR的構(gòu)建
            2.2.4 過表達DANCR質(zhì)粒的構(gòu)建
            2.2.5 細胞轉(zhuǎn)染
            2.2.6 MTT實驗
            2.2.7 細胞劃痕實驗
            2.2.8 Transwell實驗
            2.2.9 DANCR靶基因的生物信息學(xué)預(yù)測
            2.2.10 qRT-PCR檢測轉(zhuǎn)染si-DANCR后 miR-135a-5p的表達變化
        2.3 統(tǒng)計學(xué)分析
    3 實驗結(jié)果
        3.1 四種TSCC細胞中LncRNA DANCR的相對表達量以及si-DANCR轉(zhuǎn)染效率的測定
        3.2 TSCC細胞中沉默或過表達DANCR的 MTT實驗
        3.3 TSCC細胞中沉默或過表達DANCR的劃痕實驗
        3.4 TSCC細胞中沉默或過表達DANCR的 Transwell實驗
        3.5 qRT-PCR檢測TSCC細胞中抑制或過表達DANCR后 miR-135a-5p的表達變化
    4 討論
第二部分 :DANCR/miR-135a-5p通路促TSCC進展的機制研究
    1 前言
    2 材料及方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 實驗試劑
            2.1.2 實驗儀器
        2.2 實驗方法
            2.2.1 熒光素酶報告
            2.2.2 qRT-PCR檢測TSCC細胞中miR-135a-5p的相對表達量
            2.2.3 miR-135a-5p過表達細胞模型的建立
            2.2.4 TSCC細胞過表達miR-135a-5p的 MTT實驗、劃痕實驗及Transwell實驗
            2.2.5 qRT-PCR檢測過表達miR-135a-5p后 KLF8 的表達變化
            2.2.6 Western blot檢測過表達miR-135a-5p后 KLF8 的表達變化
            2.2.7 qRT-PCR檢測沉默DANCR的 TSCC細胞中KLF8 的表達變化
        2.3 統(tǒng)計學(xué)分析
    3 實驗結(jié)果
        3.1 雙熒光素酶報告
        3.2 qRT-PCR檢測TSCC細胞中miR-135a-5p的相對表達量
        3.3 過表達miR-135a-5p細胞模型的建立
        3.4 TSCC細胞中過表達miR-135a-5p的 MTT實驗、劃痕實驗及Transwell實驗
        3.5 qRT-PCR和 Western blot檢測過表達miR-135a-5p后 KLF8 的表達變化
        3.6 qRT-PCR檢測沉默DANCR的 TSCC細胞中KLF8 的表達變化
    4 討論
第三部分 :DANCR/mir-135a-5p/KLF8 軸促TSCC進展的機制及體內(nèi)實驗
    1 前言
    2 材料及方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 實驗試劑
            2.1.2 實驗儀器
        2.2 實驗方法
            2.2.1 siRNA-KLF8 的構(gòu)建
            2.2.2 miR-135a-5p抑制劑逆轉(zhuǎn)si-DANCR功能作用的rescue實驗
            2.2.3 沉默KLF8 逆轉(zhuǎn)miR-135a-5p抑制劑功能作用的rescue實驗
            2.2.4 靶向DANCR sh RNA的構(gòu)建
            2.2.5 穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株的篩選和培養(yǎng)
            2.2.6 裸鼠成瘤實驗
            2.2.7 Western blot測定瘤體組織中KLF8、MMP-2、MMP-9 的蛋白表達
            2.2.8 免疫組化實驗
        2.3 統(tǒng)計學(xué)分析
    3 實驗結(jié)果
        3.1 miR-135a-5p抑制劑逆轉(zhuǎn)si-DANCR功能作用的rescue實驗
        3.2 沉默KLF8 逆轉(zhuǎn)miR-135a-5p抑制劑功能作用的rescue實驗
        3.3 LncRNA DANCR對體內(nèi)成瘤的影響及組織中KLF8 蛋白的表達
    4 討論
結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個人簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Long non-coding RNA highly up-regulated in liver cancer promotes exosome secretion[J]. Shun-Qi Cao,Hong Zheng,Bao-Cun Sun,Zheng-Lu Wang,Tao Liu,Dong-Hui Guo,Zhong-Yang Shen.  World Journal of Gastroenterology. 2019(35)
[2]Role of human papillomavirus in oropharyngeal squamous cell carcinoma: A review[J]. Robbie SR Woods,Esther M O’Regan,Susan Kennedy,Cara Martin,John J O’Leary,Conrad Timon.  World Journal of Clinical Cases. 2014(06)
[3]Non-coding RNAs and gastric cancer[J]. Pei-Fei Li,Sheng-Can Chen,Tian Xia,Xiao-Ming Jiang,Yong-Fu Shao,Bing-Xiu Xiao,Jun-Ming Guo.  World Journal of Gastroenterology. 2014(18)
[4]Non-coding RNAs in hepatitis C-induced hepatocellular carcinoma:Dysregulation and implications for early detection,diagnosis and therapy[J]. Weihong Hou,Herbert L Bonkovsky.  World Journal of Gastroenterology. 2013(44)

博士論文
[1]長鏈非編碼RNA PlncRNA-1作為內(nèi)源性競爭RNA調(diào)控雄激素受體表達促進前列腺癌進展的作用及機制研究[D]. 方梓宇.第二軍醫(yī)大學(xué) 2016



本文編號：3430748