發(fā)布時(shí)間：2021-10-10 07:30

　　第一部分蛋白酪氨酸磷酸酶受體B在結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移中的作用及機(jī)制研究研究目的:結(jié)直腸癌是一種常見的消化道惡性腫瘤,其發(fā)病率和死亡率在所有惡性腫瘤中居第2位,腫瘤轉(zhuǎn)移是影響結(jié)直腸癌患者遠(yuǎn)期生存的重要因素。蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶受體B（PTPRB）是蛋白酪氨酸磷酸酶家族的一員,有研究證實(shí)PTPRB功能失調(diào)與多種腫瘤的發(fā)生及發(fā)展有關(guān),然而它在結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移中的作用尚不清楚,在本研究中,我們將探索PTPRB在結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移中發(fā)揮的作用,并明確其內(nèi)在的分子機(jī)制。材料及方法:選取3種人結(jié)直腸癌細(xì)胞系（LOVO、HCT116、HT29）,實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)（RT-PCR）和蛋白免疫印跡技術(shù)（Western-blot）檢測(cè)各細(xì)胞系中PTPRB基因及蛋白的表達(dá)水平,細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)（Transwell）檢測(cè)各細(xì)胞系侵襲轉(zhuǎn)移能力。小干擾RNA（siRNA）或過表達(dá)質(zhì)粒分別敲除或上調(diào)結(jié)腸癌細(xì)胞中PTPRB的表達(dá),觀察敲除或過表達(dá)PTPRB后各結(jié)腸癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的變化。免疫熒光實(shí)驗(yàn)觀察結(jié)腸癌細(xì)胞表型,RT-PCR和Western-blot檢測(cè)上皮間質(zhì)化（EMT）相關(guān)蛋白的表達(dá)情況,探索PTPRB與結(jié)直腸... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：147 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

PTPRBmRNA在LOVO，HT29和HCT116中的表達(dá)情況（A）；PTPRB蛋白在LOVO，HT29和HCT116中的表達(dá)水平（B）

浙江大學(xué)博士學(xué)位論文正文第一部分結(jié)果32能力最弱（圖2A）。Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)直腸癌細(xì)胞的侵襲能力，其結(jié)果同細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致，LOVO的侵襲能力最強(qiáng)，HCT116次之，HT29的侵襲能力最弱（圖2B）。將1.3.1.2與1.3.1.1的實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)比分析我們發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌侵襲及轉(zhuǎn)移能力與細(xì)胞中PTPRB表達(dá)水平呈正相關(guān)。（圖2）細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)LOVO，HT29和HCT116的轉(zhuǎn)移能力（圖A）；Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)LOVO，HT29和HCT116的侵襲能力（圖B）。（**P<0.01;***P<0.001）1.3.2PTPRB對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響1.3.2.1PTPRBsiRNA和過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率的檢測(cè)為明確PTPRB對(duì)結(jié)直腸癌侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響，分別用PTPRB的siRNA和過表達(dá)質(zhì)粒下調(diào)和上調(diào)LOVO、HT29和HCT116細(xì)胞中PTPRB的表達(dá)。利用

浙江大學(xué)博士學(xué)位論文正文第一部分結(jié)果33Western-blot檢測(cè)PTPRBsiRNA和過表達(dá)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染效果，結(jié)果證實(shí)siRNA可以抑制LOVO、HT29和HCT116中PTPRB的表達(dá)（圖3A），而轉(zhuǎn)染PTPRB過表達(dá)質(zhì)粒后，三種細(xì)胞系中的PTPRB的表達(dá)水平都明顯上調(diào)（圖3B）。（圖3）PTPRBsiRNA轉(zhuǎn)染效率檢測(cè)（圖3A），PTPRB過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率檢測(cè)（圖3B）。（*P<0.05；**P<0.01；***P<0.001）1.3.2.2PTPRB與結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移能力的關(guān)系將上述敲除和過表達(dá)PTPRB的細(xì)胞接種于六孔板中，細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力，實(shí)驗(yàn)證實(shí)PTPRB敲除組36h腫瘤細(xì)胞的劃痕寬度明顯寬于對(duì)照組，劃痕愈合速度減慢，細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力減弱。相反，過表達(dá)PTPRB的結(jié)直腸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)（圖4）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3427931