目的和意義:急性髓細(xì)胞白血�。ˋML）是一種高度侵襲性的血液惡性腫瘤,其發(fā)生發(fā)展與某些基因改變密切相關(guān)。其中的FLT3-ITD突變是AML中的常見(jiàn)突變,伴有該突變的患者預(yù)后不良。近年來(lái),人們致力于開(kāi)發(fā)FLT3酪氨酸激酶抑制劑,但單藥使用效果有限,因而嘗試FLT3抑制劑聯(lián)合其他種類(lèi)藥物的應(yīng)用。本研究著眼于伴FLT3-ITD突變AML的藥物聯(lián)合治療,探討FLT3抑制劑ASP2215聯(lián)合HDAC抑制劑SAHA作用FLT3-ITD突變細(xì)胞株的藥物協(xié)同性及協(xié)同作用機(jī)制,為將來(lái)這兩類(lèi)藥物聯(lián)合治療FLT3-ITD突變AML提供理論基礎(chǔ)。方法:以不同濃度的ASP2215、SAHA單藥或兩藥聯(lián)合處理伴FLT3-ITD突變的MV4-11細(xì)胞株,CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活性,細(xì)胞甩片后瑞氏染色觀察細(xì)胞形態(tài)變化,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期,蛋白免疫印跡檢測(cè)FLT3及下游分子STAT5的磷酸化水平,凋亡相關(guān)蛋白caspase-3/9,Mcl-1,Bcl-xL,Bcl-2和Bax以及周期相關(guān)蛋白cyclin D1、CDK 6和P27^Kip1蛋白的表達(dá)水平,使用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)cycl... 

【文章來(lái)源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

FLT3受體結(jié)構(gòu)示意圖

圖 1. FLT3 受體結(jié)構(gòu)示意圖。Figure 1. Schematic diagram of FLT3 receptor structureFLT3 受體為單次跨膜糖蛋白，從 N 端到 C 端依次為：包含 5 個(gè)免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域的胞外結(jié)構(gòu)域（ED）；跨膜結(jié)構(gòu)域(TD)；胞內(nèi)近膜結(jié)構(gòu)域（JMD）；酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域 1（TKD 1）；激酶間插入序列（KI）；酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域 2（TKD2）。其中串聯(lián)重復(fù)序列（ITD）插入的區(qū)域通常位于JMD 和 TKD1 內(nèi)。

上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文V4-11 髓系細(xì)胞株含 FLT3-ITD 純合突變MV4-11 細(xì)胞株委托中科院細(xì)胞生物研究所購(gòu)自美國(guó) ATCC。提取 MV4 THP-1 細(xì)胞株的基因組 DNA，設(shè)計(jì)針對(duì) FLT3 基因 14，15 號(hào)外顯子的 PCR，對(duì)基因組 DNA 行 PCR 擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng) 2.5%瓊脂糖凝膠電泳。實(shí)驗(yàn)結(jié)果，相對(duì)于 THP-1 細(xì)胞的野生型 FLT3，MV4-11 細(xì)胞為 FLT3-ITD 純合突變（ 3A）。 代測(cè)序結(jié)果確定了 13 號(hào)染色體 FLT3 等位基因 14 號(hào)外顯子內(nèi)純合 入 了 段 30bp 的 串 聯(lián) 重 復(fù) 片 段 ， 插 入 的 重 復(fù) 片 段 序 列 CGTTGATTTCAGAGAATATGAATATGATC（見(jiàn)圖 3B）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]組蛋白去乙�；种苿㏒BHA對(duì)急性髓細(xì)胞白血病細(xì)胞的殺傷作用[J]. 徐燕華,楊春梅,錢(qián)文斌.  浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2012(05)



本文編號(hào)：3404151