長鏈非編碼RNA（long-noncoding RNA,lncRNA）是長度大于200個(gè)核苷酸序列,可以調(diào)控腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、侵襲、增殖、細(xì)胞周期及凋亡等生物學(xué)行為,在不同腫瘤組織中的表達(dá)水平有顯著差異,并具有細(xì)胞特異性,這些LncRNA有望成為新的腫瘤標(biāo)志物或治療靶點(diǎn)。Mi-Lnc70是小鼠胰腺特異表達(dá)的一個(gè)LncRNA,與小鼠成纖維細(xì)胞相比,在小鼠胰腺癌細(xì)胞中Mi-Lnc70特異性高表達(dá)。本研究根據(jù)小鼠Mi-Lnc70 DNA序列,選取不同靶點(diǎn)設(shè)計(jì)構(gòu)建了三條LNA GapmeRs,對體外培養(yǎng)小鼠胰腺癌細(xì)胞系Min6進(jìn)行Mi-Lnc70敲減,發(fā)現(xiàn)GapmeRs1#敲減效率最高。通過對不同的轉(zhuǎn)染時(shí)間、細(xì)胞密度和GapmeRs濃度的組合進(jìn)行篩選,最終確定的轉(zhuǎn)染時(shí)間72h、細(xì)胞密度9×10⁵或1.5×10⁶個(gè)/孔和75nM濃度GapmeRs為最適轉(zhuǎn)染條件,72h后檢測的敲減效率可達(dá)到50%⁸0%。通過對轉(zhuǎn)染后24h、48h和72h的細(xì)胞與空白對照和陰性對照細(xì)胞進(jìn)行活力檢測,發(fā)現(xiàn)敲減Mi-Lnc70后細(xì)胞的活力下降。利用Tran... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

LncRNA基因座在基因調(diào)控中的功能

孫冬雪長鏈非編碼RNAMi-Lnc70對小鼠胰腺癌細(xì)胞Min6的影響15圖2LncRNA在反式中的功能。引自KoppFandMendellJT[55]。Figure2Thefunctionoflncrnaintrans.FromKoppFandMendellJT[55].LncRNA在生命活動的調(diào)控中發(fā)揮重要作用，包括細(xì)胞周期、分化和表觀遺傳調(diào)控等。它不僅是遺傳信息中間載體的輔助性角色以及各種調(diào)控功能[81,82]。其中LncRNA的調(diào)控機(jī)制包括：(1)LncRNA參與染色質(zhì)開放和關(guān)閉的調(diào)控[83,84]。一些LncRNA在不同組織中表達(dá)具有特異性，它們可作為調(diào)節(jié)因子在不同信號通路中參與調(diào)控作用[85,86]。在生物的角度分析，通過RNA來調(diào)控，不需要進(jìn)行蛋白質(zhì)翻譯，當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)急性反應(yīng)時(shí)，可迅速做出反應(yīng)[87,88]。(2)LncRNA調(diào)控組蛋白修飾：其中主要包括組蛋白乙�；男揎�，它與基因活化關(guān)聯(lián)[89]，有研究報(bào)道稱，這種修飾的增多，可以降低DNA與組蛋白它們的親和作用，導(dǎo)致染色質(zhì)核小體的結(jié)構(gòu)出現(xiàn)松散，有助于DNA和轉(zhuǎn)錄因子相互結(jié)合，促使基因表達(dá)，而降低乙�；�

孫冬雪長鏈非編碼RNAMi-Lnc70對小鼠胰腺癌細(xì)胞Min6的影響19圖3lncRNA在胰腺癌中的作用機(jī)制。引自DuguangL,JinH,XiaoweiQ[140]。Figure3Themechanismoflncrnainpancreaticcancer.FromDuguangL,Jinh,XiaoweiQ[140].LncRNADANCR通過充當(dāng)miR-335-5p和miR-1972的分子海綿來促進(jìn)骨肉瘤的發(fā)生[132]。同樣，UCA1在非小細(xì)胞肺癌中發(fā)揮致癌作用[133]，其機(jī)制是通過上調(diào)miR‐193a‐3p來部分上調(diào)ERBB4，從而發(fā)揮作用[134]。另外，SNHG6-003可以通過隔離miR-26a/b并促進(jìn)肝細(xì)胞癌的進(jìn)展來上調(diào)TAK1的表達(dá)。miR31HG與miR-193b結(jié)合并調(diào)節(jié)其下游miRNA靶基因在PDAC中的表達(dá)水平。同樣，HOTAIR可能作為ceRNA發(fā)揮作用[135]，通過競爭miR-331-3p來調(diào)節(jié)HER2表達(dá)，從而在胃病的發(fā)病機(jī)理中發(fā)揮致癌作用[136]。還有研究表明，ceRNA參與多種癌癥類型的腫瘤發(fā)生，包括前列腺癌、乳腺癌、肝癌和肺癌等[137]。LncRNA癌癥易感候選物2（CASC2）通過靶向microRNA參與了幾種類型癌癥的腫瘤發(fā)生[138]，CASC2使miR-24處于海綿狀，并激活了其下游靶標(biāo)MUC6，以抑制胰腺癌的生長和進(jìn)展[137]。CASC2通過miR-24/MUC6軸在胰腺癌中發(fā)揮腫瘤抑制功能，這可能是胰腺癌治療的有希望的靶標(biāo)。盡管ceRNA研究尚處于初期階段，但眾多數(shù)據(jù)表明RNA轉(zhuǎn)錄本可控制miRNA的活性，這是轉(zhuǎn)錄后基因調(diào)控的新領(lǐng)域[139]。這種作用對癌癥的發(fā)生和發(fā)展具有深遠(yuǎn)的影響。

【參考文獻(xiàn)】：
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