背景EHF（ETS同源因子/上皮特異性ETS因子家族成員3,ESE3）是E26轉(zhuǎn)化特異性（ETS）超家族的成員。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)EHF在胰腺癌中為一種抑癌基因,通過上調(diào)E鈣粘素的表達(dá)抑制胰腺癌侵襲遷移能力。在預(yù)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)腫瘤EHF表達(dá)缺失與腫瘤浸潤調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、骨髓來源的抑制細(xì)胞以及CD8+T細(xì)胞比例相關(guān)。目前關(guān)于EHF的研究主要集中于前列腺癌以及樹突細(xì)胞分化過程。在前列腺癌中,EHF缺失能夠促進(jìn)前列腺癌干性表型的出現(xiàn)以及轉(zhuǎn)移能力的增加;在樹突細(xì)胞中,EHF高表達(dá)能夠促進(jìn)樹突細(xì)胞成熟。然而目前尚無關(guān)于腫瘤EHF缺失與免疫微環(huán)境的相關(guān)研究。近年來,以抗PD1/PD-L1為代表的免疫檢查點(diǎn)治療為胰腺癌帶來了新的希望;然而,因胰腺癌高度免疫抑制的微環(huán)境特點(diǎn),在現(xiàn)有的臨床試驗(yàn)中,大部分胰腺癌患者對單藥抗PD1/PD-L1治療反應(yīng)不佳。因此,目前臨床亟需尋找有效的能夠整體評估胰腺癌免疫微環(huán)境狀態(tài)的分子標(biāo)記以指導(dǎo)免疫治療方案的精準(zhǔn)選擇。因此,我們設(shè)計(jì)該課題以明確胰腺腫瘤細(xì)胞中EHF表達(dá)缺失在胰腺癌免疫微環(huán)境重塑中的作用,并進(jìn)一步探究EHF是否能夠成為指導(dǎo)胰腺癌免疫治療方案選擇的生物標(biāo)記。方法1... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：113 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

(A)小鼠胰腺癌皮下成瘤模型的實(shí)驗(yàn)方案：用PANC02-vector或PANC02-EHF對免疫健全小鼠C57BL/6小鼠和免疫缺陷小鼠BALB/c進(jìn)行皮下成瘤實(shí)驗(yàn)

發(fā)現(xiàn)與PANC02-vector組小鼠相比，PANC02-EHF組小鼠腫瘤浸潤的Treg, MDSCs比例顯著減少。(圖2.1B-C)TAM在PANC02-EHF組小鼠的浸潤比例也有所減低，但是沒有達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。進(jìn)一步我們對CD8+T細(xì)胞的表型進(jìn)行分群檢測。首先是對凋亡的CD8+T細(xì)胞進(jìn)行檢測。處理樣品的過程均在冰上進(jìn)行并且加快操作，保證兩組組織處理時(shí)

(2) 將由不同的胰腺癌細(xì)胞誘導(dǎo)及增殖出的 Treg 細(xì)胞通過磁珠分選方法進(jìn)行富集，富集后補(bǔ)充 IL2 進(jìn)行培養(yǎng)。在 Transwell 小室下室中鋪 5×104個(gè) Treg 細(xì)胞，上室放入 2.5×104個(gè) CFSE 染料標(biāo)記的 CD8+T 細(xì)胞。(3) 共培養(yǎng) 5 天后檢測 CD8+T 細(xì)胞 CFSE 信號衰減。用 CD8+T 細(xì)胞的增殖活性來代表 Treg 細(xì)胞的功能。3.2 結(jié)果3.2.1 腫瘤 EHF 的表達(dá)對體外 Treg 細(xì)胞向腫瘤細(xì)胞趨化能力的影響為確定是否 EHF 的表達(dá)水平能夠影響腫瘤細(xì)胞對 Treg 細(xì)胞的趨化。我們將分選的 Treg 細(xì)胞放入 transwell 小室的上室，下室放入腫瘤細(xì)胞，共培養(yǎng) 24 小時(shí)后計(jì)數(shù)趨化到下室的 Treg 細(xì)胞的數(shù)量, 陽性對照采用趨化因子 CCL5。計(jì)數(shù)采用流式檢測計(jì)數(shù)的方法。不同 EHF 表達(dá)水平的細(xì)胞其 Treg 細(xì)胞向腫瘤細(xì)胞的趨化能力無顯著差異。3.2.2 腫瘤 EHF 的表達(dá)對 na ve CD4+T 細(xì)胞向 Treg 細(xì)胞誘導(dǎo)的影響

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]運(yùn)用抗PD-L1抗體治療晚期癌癥患者的安全性與療效評價(jià)[J]. 姜孝新,Julie R.Brahmer,Scott S.Tykodi,Laura Q.M.Chow.  腫瘤藥學(xué). 2012(03)



本文編號：3393704