發(fā)布時(shí)間：2021-09-11 17:45

　　研究背景和目的:胃癌是我國(guó)最常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤之一,其發(fā)病率和死亡率分別占所有惡性腫瘤的第2位和第3位,晚期比例高達(dá)80%,5年生存率不足10%。胃癌腹膜轉(zhuǎn)移及其合并的惡性腹水是胃癌患者的主要死因之一。目前胃癌腹膜轉(zhuǎn)移的確切機(jī)制尚未完全闡明,臨床治療效果較差。胃癌惡性腹水缺乏有效的研究模型,制約了相關(guān)研究的進(jìn)展。腫瘤類器官是一種新型體外3D模型,能極大程度保留原腫瘤細(xì)胞的特征。目前,許多常見(jiàn)腫瘤來(lái)源的腫瘤類器官均已成功構(gòu)建,并且有報(bào)道用于臨床藥敏試驗(yàn)。但目前尚未有培養(yǎng)惡性腹水來(lái)源腫瘤類器官的報(bào)道。在這里我們用胃癌患者的惡性腹水構(gòu)建腫瘤類器官模型,并通過(guò)病理組織學(xué)和基因組學(xué)等方法進(jìn)行鑒定。針對(duì)腹水上清能促進(jìn)腫瘤類器官生長(zhǎng)的現(xiàn)象,我們從外泌體以及細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路變化等角度進(jìn)行了初步研究,以期進(jìn)一步深入探討胃癌腹膜轉(zhuǎn)移的分子生物學(xué)機(jī)制。研究方法:1、收集胃癌患者腹水用于類器官培養(yǎng)。腫瘤類器官培養(yǎng)的主要步驟:離心分離腹水上清和細(xì)胞沉淀,顯微鏡下細(xì)胞計(jì)數(shù),每400個(gè)細(xì)胞團(tuán)/1000-2000個(gè)單細(xì)胞用50μl Matrigel重懸,混勻后接種于預(yù)熱24孔板。將24孔板置于37℃培養(yǎng)箱,待Mat... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)上海市 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

正常胃類器官（左）胃癌類器官（右）

海軍軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文-14-圖2來(lái)源于胃癌腹水的腫瘤類器官。松散型（左），致密型（右）。為了增加類器官培養(yǎng)成功率與產(chǎn)量，我們嘗試向培養(yǎng)基中添加腹水上清以模擬腹水腫瘤細(xì)胞在體內(nèi)的微環(huán)境。結(jié)果表明，添加腹水上清后，類器官的生長(zhǎng)可以得到明顯加快，表現(xiàn)為類器官球體增大和數(shù)量增多（圖3）。然而，過(guò)高的腹水上清比例（一般大于50%時(shí)）反而不利于腫瘤類器官生長(zhǎng)。腹水上清促進(jìn)類器官生長(zhǎng)的最大效應(yīng)濃度具有個(gè)體差異性，一般在10-50%之間，個(gè)別患者腹水上清對(duì)其類器官生長(zhǎng)無(wú)影響或者在100%腹水上清下類器官生長(zhǎng)最佳。利用該優(yōu)化后的培養(yǎng)體系，我們成功建立了來(lái)自36例患者的47株胃癌腹水來(lái)源的腫瘤類器官（其中2例患者腹水進(jìn)行3次取樣培養(yǎng)，9例患者進(jìn)行2次取樣培養(yǎng)），成功率達(dá)到95%。

胃癌腹水來(lái)源的腫瘤類器官的培養(yǎng)及腹水促類器官生長(zhǎng)機(jī)制的初步研究-15-圖3胃癌腹水上清對(duì)MADOs的影響。A：添加不同比例腹水上清后，胃癌腹水來(lái)源的腫瘤類器官隨時(shí)間的形態(tài)變化；B：添加不同比例腹水上清后（0%，10%，25%，50%），兩例胃癌患者腹水來(lái)源的腫瘤類器官生長(zhǎng)明顯加快；C：4例患者M(jìn)ADOs在經(jīng)不同濃度腹水上清處理后（0%，10%，25%，50%，100%），統(tǒng)計(jì)各組類器官生長(zhǎng)面積。二、腹水類器官的組織病理學(xué)特征為了分析MADOs能否保留原代腹水腫瘤細(xì)胞的組織學(xué)特征，我們利用了H&E染色和免疫組織化學(xué)染色的病理學(xué)方法。MADOs細(xì)胞具有典型腫瘤細(xì)胞的形態(tài)特征：

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]STAT-3 correlates with lymph node metastasis and cell survival in gastric cancer[J]. Jing-Yu Deng,Xiang-Yu Liu,Han Liang,Department of Gastric Oncology Division,Tianjin Medical University Cancer Hospital and City Key Laboratory of Tianjin Cancer Center,Tianjin 300060,China Dan Sun,Lung Cancer Institute,Tianjin Medical University General Hospital,Tianjin 300060,China Yi Pan,Department of Pathology,Tianjin Medical University Cancer Hospital,Tianjin 300060,China.  World Journal of Gastroenterology. 2010(42)



本文編號(hào)：3393437