目的本研究檢測(cè)了胃癌前病變患者血清外泌體中長(zhǎng)鏈非編碼RNA（Long noncoding RNA,Lnc RNA）的特異性表達(dá),研究胃癌前病變患者血清外泌體對(duì)GES-1細(xì)胞活性的作用;使用全反式視黃酸（All trans retinoic acid,ATRA）進(jìn)行干預(yù),觀(guān)察ATRA對(duì)GES-1細(xì)胞活性的調(diào)節(jié)作用。同時(shí)構(gòu)建胃癌前病變的大鼠模型,造模成功后使用ATRA進(jìn)行持續(xù)干預(yù),通過(guò)觀(guān)察大鼠血清外泌體及胃組織中Lnc RNA HOXA10的表達(dá),結(jié)合病理表現(xiàn)探討ATRA通過(guò)下調(diào)Lnc RNA HOXA10的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)抑制胃癌前病變狀態(tài)惡性轉(zhuǎn)化的作用。方法提取胃癌前病變患者及正常對(duì)照人群血清中的外泌體,根據(jù)課題組前期測(cè)序結(jié)果,采用q RT-PCR檢測(cè)差異表達(dá)的Lnc RNA;將胃癌前病變患者血清外泌體與GES-1細(xì)胞在無(wú)外泌體血清培養(yǎng)基中共培養(yǎng)作為實(shí)驗(yàn)組,在培養(yǎng)基中加入5μM ATRA作為實(shí)驗(yàn)干預(yù)組,其中外泌體及視黃酸濃度為0為空白對(duì)照組,僅在培養(yǎng)基中加入5μM ATRA作為干預(yù)對(duì)照組,觀(guān)察各組細(xì)胞增殖、凋亡及周期的變化,檢測(cè)各組細(xì)胞中Lnc RNA HOXA10的表達(dá);購(gòu)買(mǎi)3周齡的雌性W... 

【文章來(lái)源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁(yè)數(shù)】：80 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

動(dòng)物模型建立及相關(guān)干預(yù)示意圖

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文273.9分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)至少三次，使用SPSS23.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。所有數(shù)值均表示為平均值±SEM。Studentt檢驗(yàn)用于兩組間的比較，ANOVA用于兩組以上的實(shí)驗(yàn)。P<0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4結(jié)果4.1外泌體的鑒定外泌體試劑盒提取外泌體后，在透射電子顯微鏡(TEM)下驗(yàn)證外泌體的形態(tài)(圖2)。圖2透射電鏡下血清中外泌體形態(tài)鑒定。Figure2Morphologicalidentificationofexosomesinserumundertransmissionelectronmicroscope.4.2外泌體中差異LncRNA的特異性表達(dá)熒光定量PCR的結(jié)果如圖3所示，在胃癌前病變患者血清外泌體提取的總RNA中檢測(cè)前期課題組發(fā)現(xiàn)的11條差異表達(dá)LncRNA后發(fā)現(xiàn)，探針名為P33715的LncRNA表達(dá)差異最為明顯，此LncRNA為L(zhǎng)ncRNAHOXA10。

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文28圖3胃癌前病變患者(n=20)與健康對(duì)照組(n=10)差異性表達(dá)的LncRNA在血清外泌體中的檢測(cè)。**,P<0.01Figure3DetectionofdifferentiallyexpressedlncRNAsinserumexosomesbetweenpatientswithgastricprecancerouslesions(n=20)andhealthycontrols(n=10).*,P<0.014.3LncRNA序列的驗(yàn)證由于LncRNA的實(shí)際序列通常與其預(yù)測(cè)序列不同，我們通過(guò)cDNA末端快速擴(kuò)增(RACE)，得到了5’端及3’端的序列并與LncRNAHOXA10全長(zhǎng)序列對(duì)比，結(jié)果如圖所示。LncRNAHOXA10的全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄本是1785nt。序列全長(zhǎng)檢索自GenBank(NR_037939.2)。

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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本文編號(hào)：3384480