發(fā)布時間：2021-08-29 20:40

　　目的:血管新生（angiogenesis）在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。在腫瘤形成早期,腫瘤直徑超過2-3mm時,就必須生成血管來維持氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)的輸送。腫瘤的血管表現(xiàn)為孔隙多,表面粗糙,細(xì)胞間連接松散,使得腫瘤血管通透性增強(qiáng),有利于腫瘤細(xì)胞的血道轉(zhuǎn)移,且在腫瘤周圍形成特殊的微環(huán)境。目前,抑制腫瘤血管新生的靶向藥物被成功研發(fā)并廣泛應(yīng)用于臨床,并取得較好的治療效果。但是也出現(xiàn)了藥物副反應(yīng)、藥效低、耐藥等一系列問題。因此,探尋其他潛在的可作為抗腫瘤血管新生治療靶點(diǎn)的分子就顯得尤為重要。RNA編輯（RNA editing）是一種重要的轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)機(jī)制,發(fā)生A到I的RNA編輯的抗酶抑制因子1（antizyme inhibitor1,AZIN1）參與調(diào)控腫瘤發(fā)生發(fā)展的多種生物學(xué)行為。本文擬通過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)闡明RNA編輯型AZIN1在腫瘤血管新生中的作用和機(jī)制。研究方法:1、采用Real-time PCR檢測結(jié)直腸癌細(xì)胞系中AZIN1的表達(dá)。2、構(gòu)建質(zhì)粒,包裝慢病毒,用慢病毒感染HCT 116和HT-29細(xì)胞,構(gòu)建穩(wěn)定轉(zhuǎn)染野生型和編輯型AZIN1及對照的HCT 116和HT-29細(xì)胞系,用嘌呤霉... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

RT-qPCR實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)直腸癌細(xì)胞系中AZIN1的表達(dá)情況

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文15的表達(dá)情況。Westernblot結(jié)果顯示，野生型和編輯型組細(xì)胞中V5的表達(dá)均升高，且表達(dá)量相近（圖2A）。RT-qPCR結(jié)果顯示編輯型組細(xì)胞中的編輯型與野生型AZIN1的mRNA水平的比值明顯升高（圖2B）。結(jié)果顯示過表達(dá)結(jié)果可靠，穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系建立成功，可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。圖2（A）通過Westernblot實(shí)驗(yàn)檢測HCT116和HT-29兩組穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系中V5的表達(dá)情況，GADPH作為內(nèi)參。（B）通過RT-qPCR實(shí)驗(yàn)檢測HCT116和HT-29兩組穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系中編輯型、野生型AZIN1的表達(dá)情況，GADPH作為內(nèi)參。3.3編輯型AZIN1對HUVEC的調(diào)節(jié)作用3.3.1編輯型AZIN1促進(jìn)HUVEC的遷移成管能力為探究結(jié)直腸癌細(xì)胞中編輯型AZIN1對血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移成管能力的影響，我

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文18圖4CCK-8檢測各組條件培養(yǎng)基對HUVEC增殖能力的影響。（***P<0.001）3.4編輯型AZIN1在體內(nèi)促進(jìn)血管形成和腫瘤增殖3.4.1編輯型AZIN1移植瘤生長速度顯著加快我們采用荷瘤實(shí)驗(yàn)檢測過表達(dá)編輯型AZIN1的腫瘤細(xì)胞在體內(nèi)對血管形成的調(diào)控作用以及腫瘤細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的相互作用。裸鼠兩側(cè)腋下接種HCT116細(xì)胞和HCT116與HUVEC混合液成功成瘤后，定期測量小鼠腫瘤體積，觀察至適當(dāng)時間（腫瘤體積超過2cm3或者小鼠出現(xiàn)消瘦、惡病質(zhì)等體征）終止成瘤實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示，過表達(dá)RNA編輯型AZIN1的HCT116組具有更強(qiáng)的成瘤能力，腫瘤體積明顯大于野生型和對照組（圖5A）。而且，編輯型腫瘤細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞混合接種的移植瘤體積明顯大于野生混合組和對照混合接種組的移植瘤體積（圖5B）。圖5（A）單獨(dú)接種腫瘤細(xì)胞各組裸鼠移植瘤增長曲線。（B）混合接種組移植瘤增長曲線。（n=10，*P<0.05，**P<0.01）

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Polymorphisms of AZIN1 rs2679757 and TRPM5 rs886277 are Associated with Cirrhosis Risk in Chinese Patients with Chronic Hepatitis B[J]. Li-jun Peng,Jin-sheng Guo,Zhe Zhang,Li-li Liu,Yi-rong Cao,Hong Shi,Jian Wang,Scott L.Friedman,John J.Sninsky,Ji-yao Wang.  Infection International（Electronic Edition）. 2012(02)



本文編號：3371347