研究背景與目的結(jié)直腸癌（Colorectal cancer,CRC）是目前世界上最常見的惡性腫瘤之一,據(jù)報(bào)道全球每年CRC新發(fā)病例高達(dá)136萬,死亡病例約達(dá)69萬,嚴(yán)重危害人類健康。尋找結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵分子及其相互關(guān)系,進(jìn)一步闡明結(jié)直腸癌的發(fā)病機(jī)制具有重要的意義。結(jié)直腸癌發(fā)病隨著年齡的增長(zhǎng),發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加。近年研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞衰老可能影響周圍微環(huán)境促進(jìn)腫瘤的發(fā)生。該微環(huán)境是由成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞和腫瘤周圍的細(xì)胞外基質(zhì)等共同構(gòu)成的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)。Klotho是由Kuro-o等在1997年發(fā)現(xiàn)的一種衰老相關(guān)多功能蛋白,其在生物整體抗衰老和延長(zhǎng)壽命方面的作用廣受關(guān)注。Klotho基因表達(dá)下降與壽命縮短、動(dòng)脈硬化、心腦血管等疾病的發(fā)生相關(guān)。近年來人們發(fā)現(xiàn)在一些腫瘤組織中也存在Klotho低表達(dá)現(xiàn)象,提示Klotho基因可能參與腫瘤調(diào)控。我們前期利用基因芯片篩選,發(fā)現(xiàn)Klotho基因受到表觀遺傳調(diào)控,在結(jié)腸癌細(xì)胞中低表達(dá)與啟動(dòng)子DNA高甲基化有關(guān)。本研究將進(jìn)一步闡明Klotho在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中的臨床價(jià)值和重要生物學(xué)功能,探討Klotho對(duì)間質(zhì)細(xì)胞衰老和衰老相關(guān)分泌表型的表達(dá)調(diào)控和作用機(jī)制... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：130 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１．１結(jié)直腸癌配對(duì)組織中Ｋｌｏｔｈｏ免疫組化鏡下表現(xiàn)及評(píng)分??注：放大倍數(shù)：Ａ，?Ｂ：光學(xué)顯微鏡２０〇ｘ??

部位主要在間質(zhì)細(xì)胞中，在結(jié)直腸上皮細(xì)胞中也有一定程度的表達(dá)。染色陽性呈??棕黃色顆粒狀，不同的組織中染色程度不同，提示表達(dá)的強(qiáng)度不同。與對(duì)應(yīng)的癌??旁配對(duì)組織相比，Ｋｌｏｔｈｏ在結(jié)直腸癌組織中染色明顯變淺，陽性率降低（圖１．１Ａ??和Ｂ）；免疫組化Ｋｌｏｔｈｏ表達(dá)評(píng)分統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示結(jié)直腸癌組織評(píng)分（２．６５土２．６１）??顯著低于癌旁配對(duì)組織（４．８８±４．２３）（圖１．１Ｃ）。??Ａ?Ｂ?Ｃ??Ｖ?■：丨??＾?□?Ｔ??Ｊ｜?，ｒ－?，?■??Ａｄｊａｃｅｎｔ?ｎｏｒｍａｌ?Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ?ｃａｎｃｅｒ?〇Ｊ?＇?＇???Ｎｏｒｍａｌ?Ｔｕｍｏｕｒ??圖１．１結(jié)直腸癌配對(duì)組織中Ｋｌｏｔｈｏ免疫組化鏡下表現(xiàn)及評(píng)分??注：放大倍數(shù)：Ａ，?Ｂ：光學(xué)顯微鏡２０〇ｘ??２．３?Ｋｌｏｔｈｏ蛋白表達(dá)水平與結(jié)直腸癌患者各臨床病理參數(shù)之間的相關(guān)性??我們進(jìn)一步對(duì)Ｋｌｏｔｈｏ蛋白的表達(dá)情況與患者的臨床病理資料進(jìn)行了相關(guān)性分??１１??

兩種常見細(xì)胞［３６’３７］。在本部分研究中，我們構(gòu)建這兩種細(xì)胞的復(fù)制性細(xì)胞衰老模??型，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)變平，體積變大以及ＳＡ－Ｐ－ｇａｌ陽性染色增加提示了這兩種細(xì)胞??隨著傳代過程而出現(xiàn)了衰老（圖２．１Ａ和圖２．２Ａ）。我們還運(yùn)用目前廣泛認(rèn)可的ＤＮＡ??損傷誘導(dǎo)的體外衰老細(xì)胞模型來進(jìn)一步驗(yàn)證，分別以阿霉素５０ｎｍｏｌ／Ｌ和８０ｎｍｏｌ／Ｌ??處理年輕ＨＵＶＥＣ和ＷＩ－３８細(xì)胞，藥物誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)組中ＳＡ－ｐ－ｇａｌ陽性細(xì)胞比例較??未加藥處理組明顯上升（圖２．１Ａ、Ｂ和圖２．２Ａ、Ｂ）。實(shí)時(shí)熒光定量ＰＣＲ技術(shù)和??Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ方法檢測(cè)上述細(xì)胞中的衰老標(biāo)志分子Ｐ５３、Ｐ２１的表達(dá)水平，結(jié)果發(fā)??現(xiàn)：隨著細(xì)胞的傳代，Ｐ２１、Ｐ５３的表達(dá)明顯上升；相比于對(duì)照組，藥物誘導(dǎo)的實(shí)??驗(yàn)組中Ｐ２１、Ｐ５３的表達(dá)水平亦顯著升高（圖２．１Ｃ和Ｄ、圖２．２Ｃ和Ｄ）。本研究??成功構(gòu)建了?ＨＵＶＥＣ、ＷＩ－３８兩種細(xì)胞的兩種衰老模型（復(fù)制性和阿霉素誘導(dǎo)的衰??老模型）。??２．１．２?Ｋｌｏｔｈｏ對(duì)細(xì)胞衰老的影響??Ｋｌｏｔｈｏ是一個(gè)衰老相關(guān)蛋白，Ｋｌｏｔｈｏ基因缺陷的小鼠會(huì)出現(xiàn)一系列與人類衰??老相似的行為和病理變化［８］。我們提取了年輕的和衰老的（包括復(fù)制性衰老和阿霉??素誘導(dǎo)衰老）ＨＵＶＥＣ和ＷＩ－３８細(xì)胞的總ＲＮＡ和蛋白，結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著細(xì)胞衰老，??Ｋｌｏｔｈｏ的ｍＲＮＡ和蛋白水平均下降，提示Ｋｌｏｔｈｏ與細(xì)胞衰老相關(guān)（圖２．１Ｃ和Ｄ??和圖２．２Ｃ和Ｄ）。??我們利用人重組Ｋｌｏｔｈｏ蛋白預(yù)處理上述兩種年輕細(xì)胞后再予阿霉素誘導(dǎo)衰??老。結(jié)果發(fā)現(xiàn)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]2012年中國惡性腫瘤發(fā)病和死亡分析[J]. 陳萬青,鄭榮壽,張思維,曾紅梅,左婷婷,賈漫漫,夏昌發(fā),鄒小農(nóng),赫捷.  中國腫瘤. 2016(01)
[2]Annual report on status of cancer in China, 2011[J]. Wanqing Chen,Rongshou Zheng,Hongmei Zeng,Siwei Zhang,Jie He.  Chinese Journal of Cancer Research. 2015(01)
[3]衰老及相關(guān)疾病細(xì)胞分子機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 劉俊平.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2014(03)
[4]Klotho is a serum factor related to human aging[J]. 肖能明,張焱明,鄭權(quán),顧軍.  Chinese Medical Journal. 2004(05)
[5]Senescence-like changes induced by expression of p21Waf1/Cip1 in NIH3T3 cell line[J]. XI CHEN1, WEI ZHANG2, YUN FEI GAO1, XIAO QIN SU1, ZHONG HE ZHAI1,*1 College of Life Sciences, Peking University, Beijing 100871, China2 The Key Laboratory of Cell Proliferation and Regulation Biology of the Ministry of Education, College of Life Sciences,.  Cell Research. 2002(Z1)
[6]結(jié)直腸癌趨化因子單核細(xì)胞超化蛋白-1的表達(dá)[J]. 楊春康,陳道達(dá),許東坡,田源,張景輝.  中華消化雜志. 2002(10)



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