背景:結直腸癌因其高發(fā)病率和高死亡率對人類健康構成巨大威脅。先前的研究表明,隸屬于鋅金屬蛋白酶家族的ADAMTS8在多種腫瘤中受啟動子異常甲基化調控而表達下調,并在這些腫瘤中發(fā)揮著抑癌因子的作用,但其在結直腸癌中的功能仍然未知。方法:1.采用RT-PCR和qPCR法檢測結直腸癌細胞系和原發(fā)性結直腸癌腫瘤組織中ADAMTS8的表達水平;2.利用CCK-8增殖實驗,克隆形成實驗,流式細胞術以及Transwell實驗體外評估結直腸癌細胞系在ADAMTS8影響下的生物學功能變化情況,并通過裸鼠皮下成瘤實驗進行體內驗證;3.蛋白質免疫印跡技術用于探討ADAMTS8在結直腸癌中的作用機制。結果:我們發(fā)現(xiàn):1.mRNA水平上的ADAMTS8在結直腸癌細胞系中沉默（6/7）,另外在與鄰近癌旁組織相比時,其在對應的原發(fā)腫瘤組織中表達顯著下調。DNA甲基轉移酶抑制劑5-氮雜-2’-脫氧胞苷（Aza）可使LoVo細胞系中的ADAMTS8恢復表達;2.ADAMTS8的過表達抑制細胞增殖并誘導凋亡。此外,ADAMTS8抑制細胞遷移和侵襲,并誘導細胞周期阻滯在G2/M期;3.ADAMTS8的過表達導致p-GSK3... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

ADAMTS8在結直腸癌組織中的表達Figure1.1ExpressionofADAMTS8inCRCtissuesA)UALCANdatabase；B)GEPIA；C)qRT-PCR

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文23ADAMTS8的表達，其余6種細胞系中的ADAMTS8均被沉默（圖1.2）。圖1.2RT-PCR檢測ADAMTS8在結直腸癌細胞系中的表達Figure1.2ExpressionofADAMTS8inCRCcelllines3.1.3LoVo細胞系中的ADAMTS8表達下調可通過去甲基化藥物恢復為初步探尋人結直腸癌細胞系中ADAMTS8沉默的原因，我們在LoVo細胞系中進行了A+T實驗，即Aza和TSA的聯(lián)合處理。我們發(fā)現(xiàn)去甲基化可使ADAMTS8的表達恢復（圖3）。圖1.3Aza和TSA可使LoVo細胞系中ADAMTS8的表達恢復Figure1.3RestorationofADAMTS8expressionbyAZA,TSAinLoVocellline3.2ADAMTS8在結直腸癌細胞中的生物學作用3.2.1ADAMTS8過表達穩(wěn)定株的構建通過轉染質粒（pcDNA3.1-Flag-ADAMTS8）構建過表達ADAMTS8的結直腸癌穩(wěn)定株（HCT116、HT-29），同時轉染空白質粒（pcDNA3.1）作為對照。我們

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文23ADAMTS8的表達，其余6種細胞系中的ADAMTS8均被沉默（圖1.2）。圖1.2RT-PCR檢測ADAMTS8在結直腸癌細胞系中的表達Figure1.2ExpressionofADAMTS8inCRCcelllines3.1.3LoVo細胞系中的ADAMTS8表達下調可通過去甲基化藥物恢復為初步探尋人結直腸癌細胞系中ADAMTS8沉默的原因，我們在LoVo細胞系中進行了A+T實驗，即Aza和TSA的聯(lián)合處理。我們發(fā)現(xiàn)去甲基化可使ADAMTS8的表達恢復（圖3）。圖1.3Aza和TSA可使LoVo細胞系中ADAMTS8的表達恢復Figure1.3RestorationofADAMTS8expressionbyAZA,TSAinLoVocellline3.2ADAMTS8在結直腸癌細胞中的生物學作用3.2.1ADAMTS8過表達穩(wěn)定株的構建通過轉染質粒（pcDNA3.1-Flag-ADAMTS8）構建過表達ADAMTS8的結直腸癌穩(wěn)定株（HCT116、HT-29），同時轉染空白質粒（pcDNA3.1）作為對照。我們

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Overall expression of beta-catenin outperforms its nuclear accumulation in predicting outcomes of colorectal cancers[J]. Worrawit Wanitsuwan,Samornmas Kanngurn,Teeranut Boonpipattanapong,Rassamee Sangthong,Surasak Sangkhathat.  World Journal of Gastroenterology. 2008(39)



本文編號：3351902