背景:結(jié)直腸癌因其高發(fā)病率和高死亡率對(duì)人類(lèi)健康構(gòu)成巨大威脅。先前的研究表明,隸屬于鋅金屬蛋白酶家族的ADAMTS8在多種腫瘤中受啟動(dòng)子異常甲基化調(diào)控而表達(dá)下調(diào),并在這些腫瘤中發(fā)揮著抑癌因子的作用,但其在結(jié)直腸癌中的功能仍然未知。方法:1.采用RT-PCR和qPCR法檢測(cè)結(jié)直腸癌細(xì)胞系和原發(fā)性結(jié)直腸癌腫瘤組織中ADAMTS8的表達(dá)水平;2.利用CCK-8增殖實(shí)驗(yàn),克隆形成實(shí)驗(yàn),流式細(xì)胞術(shù)以及Transwell實(shí)驗(yàn)體外評(píng)估結(jié)直腸癌細(xì)胞系在ADAMTS8影響下的生物學(xué)功能變化情況,并通過(guò)裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)進(jìn)行體內(nèi)驗(yàn)證;3.蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)用于探討ADAMTS8在結(jié)直腸癌中的作用機(jī)制。結(jié)果:我們發(fā)現(xiàn):1.mRNA水平上的ADAMTS8在結(jié)直腸癌細(xì)胞系中沉默（6/7）,另外在與鄰近癌旁組織相比時(shí),其在對(duì)應(yīng)的原發(fā)腫瘤組織中表達(dá)顯著下調(diào)。DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-氮雜-2’-脫氧胞苷（Aza）可使LoVo細(xì)胞系中的ADAMTS8恢復(fù)表達(dá);2.ADAMTS8的過(guò)表達(dá)抑制細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)凋亡。此外,ADAMTS8抑制細(xì)胞遷移和侵襲,并誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯在G2/M期;3.ADAMTS8的過(guò)表達(dá)導(dǎo)致p-GSK3... 

【文章來(lái)源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：53 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

ADAMTS8在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)Figure1.1ExpressionofADAMTS8inCRCtissuesA)UALCANdatabase；B)GEPIA；C)qRT-PCR

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文23ADAMTS8的表達(dá)，其余6種細(xì)胞系中的ADAMTS8均被沉默（圖1.2）。圖1.2RT-PCR檢測(cè)ADAMTS8在結(jié)直腸癌細(xì)胞系中的表達(dá)Figure1.2ExpressionofADAMTS8inCRCcelllines3.1.3LoVo細(xì)胞系中的ADAMTS8表達(dá)下調(diào)可通過(guò)去甲基化藥物恢復(fù)為初步探尋人結(jié)直腸癌細(xì)胞系中ADAMTS8沉默的原因，我們?cè)贚oVo細(xì)胞系中進(jìn)行了A+T實(shí)驗(yàn)，即Aza和TSA的聯(lián)合處理。我們發(fā)現(xiàn)去甲基化可使ADAMTS8的表達(dá)恢復(fù)（圖3）。圖1.3Aza和TSA可使LoVo細(xì)胞系中ADAMTS8的表達(dá)恢復(fù)Figure1.3RestorationofADAMTS8expressionbyAZA,TSAinLoVocellline3.2ADAMTS8在結(jié)直腸癌細(xì)胞中的生物學(xué)作用3.2.1ADAMTS8過(guò)表達(dá)穩(wěn)定株的構(gòu)建通過(guò)轉(zhuǎn)染質(zhì)粒（pcDNA3.1-Flag-ADAMTS8）構(gòu)建過(guò)表達(dá)ADAMTS8的結(jié)直腸癌穩(wěn)定株（HCT116、HT-29），同時(shí)轉(zhuǎn)染空白質(zhì)粒（pcDNA3.1）作為對(duì)照。我們

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文23ADAMTS8的表達(dá)，其余6種細(xì)胞系中的ADAMTS8均被沉默（圖1.2）。圖1.2RT-PCR檢測(cè)ADAMTS8在結(jié)直腸癌細(xì)胞系中的表達(dá)Figure1.2ExpressionofADAMTS8inCRCcelllines3.1.3LoVo細(xì)胞系中的ADAMTS8表達(dá)下調(diào)可通過(guò)去甲基化藥物恢復(fù)為初步探尋人結(jié)直腸癌細(xì)胞系中ADAMTS8沉默的原因，我們?cè)贚oVo細(xì)胞系中進(jìn)行了A+T實(shí)驗(yàn)，即Aza和TSA的聯(lián)合處理。我們發(fā)現(xiàn)去甲基化可使ADAMTS8的表達(dá)恢復(fù)（圖3）。圖1.3Aza和TSA可使LoVo細(xì)胞系中ADAMTS8的表達(dá)恢復(fù)Figure1.3RestorationofADAMTS8expressionbyAZA,TSAinLoVocellline3.2ADAMTS8在結(jié)直腸癌細(xì)胞中的生物學(xué)作用3.2.1ADAMTS8過(guò)表達(dá)穩(wěn)定株的構(gòu)建通過(guò)轉(zhuǎn)染質(zhì)粒（pcDNA3.1-Flag-ADAMTS8）構(gòu)建過(guò)表達(dá)ADAMTS8的結(jié)直腸癌穩(wěn)定株（HCT116、HT-29），同時(shí)轉(zhuǎn)染空白質(zhì)粒（pcDNA3.1）作為對(duì)照。我們

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Overall expression of beta-catenin outperforms its nuclear accumulation in predicting outcomes of colorectal cancers[J]. Worrawit Wanitsuwan,Samornmas Kanngurn,Teeranut Boonpipattanapong,Rassamee Sangthong,Surasak Sangkhathat.  World Journal of Gastroenterology. 2008(39)



本文編號(hào)：3351902