發(fā)布時間：2021-08-15 09:49

　　背景及目的:肺癌是最常見的惡性腫瘤之一,對人類的生命安全造成了極大的威脅。肺癌包括小細胞肺癌和非小細胞肺癌,而其中非小細胞肺癌占據(jù)了肺癌的80%-85%,所以尋找新型的非小細胞肺癌靶點刻不容緩。轉(zhuǎn)錄因子GRHL2是GRHL基因家族中的成員之一,現(xiàn)已知與各類生物學過程有關(guān),例如:損傷修復,上皮的完整性和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換等;然而,GRHL2在腫瘤中的具體機制還不清楚,并且在不同的腫瘤中發(fā)揮不同的作用,甚至作用相反。方法:在肺癌組織及癌旁組織標本中、正常人支氣管上皮細胞及肺癌細胞系運用Western Blotting、real-time PCR、IHC技術(shù),分析其中GRHL2的蛋白及mRNA表達水平;通過轉(zhuǎn)染GRHL2治理構(gòu)建過表達及干擾穩(wěn)定細胞株,運用Western Blotting技術(shù)驗證其表達水平;采用細胞生長、克隆集落形成Transwell、Wound Healing實驗,檢測GRHL2過表達和干擾后,細胞生長、轉(zhuǎn)移能力是否發(fā)生變化;生物信息學分析,檢測其可能調(diào)控的靶向基因位點,運用Western Blotting驗證靶點基因及通路相關(guān)基因的蛋白表達水平是否隨GRHL2過表達和干擾而發(fā)生... 

【文章來源】：南昌大學江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

GRHL2在非小細胞肺癌中高表達A和B、用蛋白免疫印記和熒光定量PCR分析了GRHL2在HBE和NSCLC細胞的蛋白和mRNA表達水平

圖 2.2 GRHL2 對非小細胞肺癌的生長的影響A、轉(zhuǎn)染 48h 后收樣，蛋白免疫印跡檢測 OXCT1 干擾效率。B、HBE、H1299 和 A549 細胞分別轉(zhuǎn)染 GRHL2 特異 SiRNA 干擾 GRHL2 基因表達后進行結(jié)晶紫染色實驗。C、H1299 細胞和 H292 細胞分別轉(zhuǎn)染 OXCT1 特異 SiRNA 干擾 OXCT1 基因表達后進行克隆集落形成實驗。3.3. 干擾 OXCT1 基因表達抑制了非小細胞肺癌的遷移我們將 GRHL2 的特異 siRNA 轉(zhuǎn)染到 H1299 細胞，對 H1299 細胞都進行了劃痕實驗。結(jié)果顯示，和對照組相比，干擾 GRHL2 卻能促進 H1299 細胞的遷移（圖 3.1-A）然后，對 H1299 細胞進行 Transwell 實驗，結(jié)果顯示，與對照組相比，敲低GRHL2增加了H1299細胞穿過小室的細胞數(shù)（圖3.1-B）。這說明GRHL2被干擾后，遷移能力反而得到提高。

結(jié)果顯示，和對照組相比，干擾 GRHL2 卻能促進 H1299 細胞的遷移（圖 3.1-A）然后，對 H1299 細胞進行 Transwell 實驗，結(jié)果顯示，與對照組相比，敲低GRHL2增加了H1299細胞穿過小室的細胞數(shù)（圖3.1-B）。這說明GRHL2被干擾后，遷移能力反而得到提高。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]2014年中國分地區(qū)惡性腫瘤發(fā)病和死亡分析[J]. 陳萬青,孫可欣,鄭榮壽,張思維,曾紅梅,鄒小農(nóng),赫捷.  中國腫瘤. 2018(01)



本文編號：3344319