背景及目的:肺癌是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,對(duì)人類(lèi)的生命安全造成了極大的威脅。肺癌包括小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌,而其中非小細(xì)胞肺癌占據(jù)了肺癌的80%-85%,所以尋找新型的非小細(xì)胞肺癌靶點(diǎn)刻不容緩。轉(zhuǎn)錄因子GRHL2是GRHL基因家族中的成員之一,現(xiàn)已知與各類(lèi)生物學(xué)過(guò)程有關(guān),例如:損傷修復(fù),上皮的完整性和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換等;然而,GRHL2在腫瘤中的具體機(jī)制還不清楚,并且在不同的腫瘤中發(fā)揮不同的作用,甚至作用相反。方法:在肺癌組織及癌旁組織標(biāo)本中、正常人支氣管上皮細(xì)胞及肺癌細(xì)胞系運(yùn)用Western Blotting、real-time PCR、IHC技術(shù),分析其中GRHL2的蛋白及mRNA表達(dá)水平;通過(guò)轉(zhuǎn)染GRHL2治理構(gòu)建過(guò)表達(dá)及干擾穩(wěn)定細(xì)胞株,運(yùn)用Western Blotting技術(shù)驗(yàn)證其表達(dá)水平;采用細(xì)胞生長(zhǎng)、克隆集落形成Transwell、Wound Healing實(shí)驗(yàn),檢測(cè)GRHL2過(guò)表達(dá)和干擾后,細(xì)胞生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移能力是否發(fā)生變化;生物信息學(xué)分析,檢測(cè)其可能調(diào)控的靶向基因位點(diǎn),運(yùn)用Western Blotting驗(yàn)證靶點(diǎn)基因及通路相關(guān)基因的蛋白表達(dá)水平是否隨GRHL2過(guò)表達(dá)和干擾而發(fā)生... 

【文章來(lái)源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：47 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

GRHL2在非小細(xì)胞肺癌中高表達(dá)A和B、用蛋白免疫印記和熒光定量PCR分析了GRHL2在HBE和NSCLC細(xì)胞的蛋白和mRNA表達(dá)水平

圖 2.2 GRHL2 對(duì)非小細(xì)胞肺癌的生長(zhǎng)的影響A、轉(zhuǎn)染 48h 后收樣，蛋白免疫印跡檢測(cè) OXCT1 干擾效率。B、HBE、H1299 和 A549 細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染 GRHL2 特異 SiRNA 干擾 GRHL2 基因表達(dá)后進(jìn)行結(jié)晶紫染色實(shí)驗(yàn)。C、H1299 細(xì)胞和 H292 細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染 OXCT1 特異 SiRNA 干擾 OXCT1 基因表達(dá)后進(jìn)行克隆集落形成實(shí)驗(yàn)。3.3. 干擾 OXCT1 基因表達(dá)抑制了非小細(xì)胞肺癌的遷移我們將 GRHL2 的特異 siRNA 轉(zhuǎn)染到 H1299 細(xì)胞，對(duì) H1299 細(xì)胞都進(jìn)行了劃痕實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示，和對(duì)照組相比，干擾 GRHL2 卻能促進(jìn) H1299 細(xì)胞的遷移（圖 3.1-A）然后，對(duì) H1299 細(xì)胞進(jìn)行 Transwell 實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，敲低GRHL2增加了H1299細(xì)胞穿過(guò)小室的細(xì)胞數(shù)（圖3.1-B）。這說(shuō)明GRHL2被干擾后，遷移能力反而得到提高。

結(jié)果顯示，和對(duì)照組相比，干擾 GRHL2 卻能促進(jìn) H1299 細(xì)胞的遷移（圖 3.1-A）然后，對(duì) H1299 細(xì)胞進(jìn)行 Transwell 實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，敲低GRHL2增加了H1299細(xì)胞穿過(guò)小室的細(xì)胞數(shù)（圖3.1-B）。這說(shuō)明GRHL2被干擾后，遷移能力反而得到提高。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]2014年中國(guó)分地區(qū)惡性腫瘤發(fā)病和死亡分析[J]. 陳萬(wàn)青,孫可欣,鄭榮壽,張思維,曾紅梅,鄒小農(nóng),赫捷.  中國(guó)腫瘤. 2018(01)



本文編號(hào)：3344319