背景:糖尿病和癌癥同為慢性炎癥性疾病,糖尿病人即使血糖控制良好,體內(nèi)慢性炎癥狀況依然存在,這種炎癥狀況大大增加了腎細(xì)胞癌（Renal Cell Carcinoma,RCC）發(fā)生的危險性及死亡率。目前臨床上腎細(xì)胞癌主要的治療方法是手術(shù)切除,缺乏有效的藥物治療方案。因此,尋找兼有安全有效地拮抗腎癌的優(yōu)化降糖方案對預(yù)防糖尿病合并RCC的發(fā)生具有重要意義。方法:（1）收集12例RCC患者,合并或不合并二型糖尿�。═2DM）的新鮮癌組織及相關(guān)臨床病理資料,另選取14例RCC（合并或不合并T2DM）病例,收集其石蠟組織切片樣本和相關(guān)臨床病理資料。將組織標(biāo)本分為兩組,單純RCC組和RCC合并糖尿病組。檢測人腎癌組織中自噬相關(guān)蛋白、IGF-1及IGF-1R的表達情況。（2）在體外實驗中用786-O及OS-RC-2兩個腎癌細(xì)胞株作為腎細(xì)胞癌模型。以IGF-1（胰島素樣生長因子）刺激模擬糖尿病炎癥微環(huán)境,加以不同劑量的二甲雙胍處理,用流式細(xì)胞術(shù),分子實驗檢測增殖、凋亡及自噬相關(guān)蛋白的表達。結(jié)果:（1）在12例RCC組織標(biāo)本中,RCC合并T2DM腎癌組織中IGF-1及IGF-1R表達明顯高于在單純RCC組,... 

【文章來源】：寧波大學(xué)浙江省

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

腎癌診斷流程圖

6 結(jié)果6.1 T2DM環(huán)境使RCC組織處于自噬受抑制狀態(tài)首先，采用HE 染色明確腎細(xì)胞癌病理改變。如圖2 所示，配對癌旁組織鏡下可見腎皮質(zhì)中有許多大小不等散在分布的腎小球，周圍密布腎小管橫斷面。細(xì)胞排列整齊，管腔清晰。而腎腫瘤由透明細(xì)胞構(gòu)成，細(xì)胞體積較大，具有豐富的透明胞質(zhì)，核呈卵圓形，較為一致。為了探索腎細(xì)胞癌病人腎癌組織中自噬相關(guān)蛋白LC3B 是否存在表達差異，我們采用 Western Blot 法和免疫熒光染色檢測RCC 患者在合并或不合并T2DM 時，腎癌組織中 LC3B 的蛋白水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)合并T2DM 的RCC 患者腎癌組織中LC3B 蛋白的表達水平低于單純RCC 患者腎癌組織（圖 3.1），免疫熒光結(jié)果觀察到RCC 伴T2DM 組腎癌組織切片中 LC3B 的免疫熒光信號顯著少于單純RCC 組腎癌組織切片（圖3.2）。這些結(jié)果表明在合并T2DM 的 RCC 患者腎癌組織中自噬相關(guān)蛋白的表達較少

圖3 T2DM 患者的RCC 組織中LC3B 蛋白的表達量下調(diào)。①Western Blot 法檢測合并（RCC+DM+）或不合并（RCC+ DM-）T2DM 的 RCC 患者腎癌組織中 LC3B 蛋白的表達水平。②免疫熒光分析合并（RCC+ DM+）或不合并（RCC+ DM-）T2DM 的RCC 患者腎癌組織中LC3B 的表達差異。LC3B 以白色箭頭標(biāo)示。免疫熒光圖片拍攝于630x，20 μm 比例尺表示。Figure. 3 The expression of autophagy related proteins are decreased in the RCCtissues of T2DM patients. ① Protein levels of autophagy-related proteins LC3 in RCCtumor tissues from patients with (RCC+ DM+) or without (RCC+ DM-) T2DM. ②Representative images of immunofluorescence analysis of LC3 in RCC tissues from patientswith (RCC+ DM+) or without (RCC+ DM-) T2DM. LC3B was indicated by white arrow.Immunofluorescence photo were taken at 630x, scale bar indicates 20 μm.6.2 二甲雙胍可以激活786-O細(xì)胞發(fā)生自噬為了闡明二甲雙胍對自噬的調(diào)控作用，本課題分別用電子顯微鏡，自噬慢病毒和Western blot 自噬相關(guān)蛋白分析檢測自噬水平。我們使用不同濃度的二甲雙胍（0、1、5 或10 mM）處理786-O 細(xì)胞（人RCC 細(xì)胞株）。如圖 4.1 所示，二甲雙胍可以促進


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