發(fā)布時間：2021-08-10 12:31

　　目的:研究人膀胱移行上皮細(xì)胞癌（transitional cell carcinoma of bladder,TCCB）中磷脂酶Cε（PLCε）、磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）、細(xì)胞周期蛋白A（Cdc25a）的表達(dá)、相關(guān)性,且與膀胱癌病理分級分期的關(guān)系。探討PLCε對人膀胱癌T24和BIU細(xì)胞瓦伯格效應(yīng)及TCCB增殖的影響,以及分子機制。方法:（1）免疫組織化學(xué)法檢測56例人膀胱移行上皮細(xì)胞癌組織及29例癌旁組織中PLCε和LDHA蛋白的表達(dá),正置顯微鏡下拍照,統(tǒng)計學(xué)方法分析PLCε和LDHA的表達(dá)與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系及二者的相關(guān)性。（2）利用干擾PLCε表達(dá)的慢病毒感染T24細(xì)胞和BIU細(xì)胞敲減PLCε的表達(dá),收集各組細(xì)胞按照葡萄糖測定試劑盒和乳酸測定試盒的說明書分別檢測各組膀胱癌細(xì)胞利用葡萄糖和生成乳酸的情況,MTT試驗檢測T24和BIU細(xì)胞的增殖情況,FCM檢測T24和BIU細(xì)胞的細(xì)胞周期變化情況,western blot檢測PLCε、AKT、p-AKT、p GSK-3β、Cdc25a、c-myc、Cyclind1及瓦伯格效應(yīng)相關(guān)分子PKM2、GLUT1、LDHA的表達(dá)變化情... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

HE染色和免疫化

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文同第一部分2 結(jié)果2.1 慢病毒成功感染膀胱癌細(xì)胞并檢測 PLCε 的干擾效果熒光顯微鏡下觀察到慢病毒成功感染 T24 細(xì)胞和 BIU 細(xì)胞（圖 2.1A）。qP結(jié)果顯示在 T24 細(xì)胞和 BIU 細(xì)胞中，感染 LV-shPLCε 組 mRNA 水平 PLCε 的表均低于 LV-shNC 組（P＜0.01）；而空白對照組、LV-shNC 組 PLCε 表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)異（P＞0.05）(圖 2. 1B、C),實驗結(jié)果為后續(xù)實驗順利進(jìn)行奠定基礎(chǔ)。

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文葡萄糖消耗檢測實驗結(jié)果顯示，在 T24 細(xì)胞中轉(zhuǎn)染 LV-shPLCε 組 24h 利用葡萄糖的能力較 LV-shNC 組和 Blank 組均減弱（P<0.001）(圖 2.2A)，在 BIU 細(xì)胞中轉(zhuǎn)染 LV-shPLCε 組 24h 利用葡萄糖的能力較 LV-shNC 組和 Blank 組均減弱（P<0.001）(圖 2.2c);乳酸生成檢測實驗顯示，在 T24 細(xì)胞中轉(zhuǎn)染 LV-shPLCε 組 24h生成乳酸的量較 LV-shNC 組和 Blank 組均減弱（P<0.001）（圖 2.2B）; 在 BIU 細(xì)胞中轉(zhuǎn)染 LV-shPLCε 組 24h 生成乳酸的量較 LV-NC 組和 Blank 組均減弱（P<0.01）（圖 2.2D）。結(jié)果表明下調(diào) PLCε 表達(dá)降低了 T24 和 BIU 細(xì)胞利用葡萄糖及生成乳酸的能力。


本文編號：3334067