肺癌——作為一種全球常見的惡性腫瘤疾病,其超高的發(fā)病率和死亡率,嚴(yán)重威脅人類的健康和生命。作為其兩種亞型之一占比最多的非小細(xì)胞肺癌,一經(jīng)確診就處于不能通過手術(shù)治療的晚期階段或轉(zhuǎn)移階段,只能通過放療或化療的手段治療,如:順鉑、卡鉑及依托泊苷等化療藥物,但這些藥物毒性較大,且長期使用易產(chǎn)生藥物耐受性,因此尋找一種高效、低毒的抗癌藥物迫切需求。因?yàn)楹Ｑ笊锷嬖讵?dú)特的高鹽、高壓、低溫、暗光、缺氧和強(qiáng)腐蝕性的惡劣環(huán)境,其酶的氨基酸組成或序列都與陸地生物蛋白有很大不同,在種類繁多的海洋蛋白酶的氨基酸序列中,潛在著許多具有生物活性的氨基酸序列的活性蛋白酶。因此,基于PI3K/AKT/mTOR和ERK/MAPK信號通路,本碩士學(xué)位論文探討沙蠶蛋白酶（NAP）對抗肺癌機(jī)制研究。首先,采用轉(zhuǎn)錄組測序法進(jìn)行研究,根據(jù)研究結(jié)果我們選擇了PI3K/AKT/mTOR和MAPK這兩條信號通路作為本文的研究方向。接著通過體外實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞劃痕、細(xì)胞周期和Western Blotting等實(shí)驗(yàn),得知NAP可能是通過抑制PI3K/AKT/mTOR通路來誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的。隨后我們檢測了不同時(shí)間段p-ERK,p-AKT和clea... 

【文章來源】：浙江海洋大學(xué)浙江省

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

技術(shù)路線流程圖

表 3-1 RNA 純度Tab.3-1 Purity of RNA膠圖編號樣品名稱濃度(ng/μl)總量(μg)OD260/280OD260/230RIN 檢測結(jié)果1H1299(空白組 1)737.80 10.31 2.00 1.72 8.10 A2H1299(空白組 2)735.00 9.97 1.90 1.67 8.80 A3H1299(30 μg/m LNAP 1)703.60 9.81 1.94 1.73 7.90 A4H1299(30 μg/m LNAP 2)660.40 7.21 1.92 1.72 9.30 A

第三章沙蠶蛋白酶對H1299細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄組的影響153.3.2Heatmap結(jié)果分析NAP處理H1299前后，有顯著性差異表達(dá)的基因共有219個(gè)，如下圖所示，選用紅色、綠色和黑色來反映相對較高或較低的表達(dá)水平。圖3-2NAP處理（NAP1-3）和對照細(xì)胞（Con1-3）之間基因具有顯著性差異的熱圖Fig.3.2thermogramofsignificantdifferencebetweennaptreatment(nap1-3)andcontrolcell(con1-3)3.3.3GO功能注釋分析分別將實(shí)驗(yàn)組含NAP和不含NAP兩種樣品的差異基因進(jìn)行GO注釋，并通過軟件進(jìn)行GO注釋統(tǒng)計(jì)，根據(jù)意義的不同獲得20個(gè)GO項(xiàng)，分為三類，如圖3-3所示：生物過程組11項(xiàng)（綠色柱體）、細(xì)胞組7項(xiàng)（紅色柱體）、分子功能組2項(xiàng)（藍(lán)色柱體）。表3-2H1299細(xì)胞gene部分差異基因的GO富集結(jié)果Tab.3-2GOEnrichmentResultsofGenePartialDifferentialGenesinH1299CellsTermTypeGOTermGOIDD219numD219percentbiological_processmulticellularorganismalprocessGO:00325012020/219biological_processregulationofbiologicalprocessGO:00507893535/219biological_processgrowthGO:004000755/219biological_processreproductiveprocessGO:002241488/219biological_processresponsetostimulusGO:00508962222/219

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]沙蠶蛋白酶的熒光標(biāo)記及細(xì)胞攝取機(jī)制研究[J]. 杲亞許,丁國芳,楊最素,余方苗,黃芳芳,唐云平,陳艷,陳銳.  中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào). 2019(02)
[2]沙蠶活性蛋白酶誘導(dǎo)人肺癌SPC-A-1細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究[J]. 張國梅,楊最素,丁國芳,黃芳芳,趙玉勤.  現(xiàn)代食品科技. 2015(03)
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[8]溶栓素的分離純化及特性測定[J]. 云龍,崔佳樂,付海英,劉繼偉,李奇,洪敏.  中國生化藥物雜志. 2005(01)

博士論文
[1]沙蠶纖溶蛋白酶的生化與分子生物學(xué)研究[D]. 張?jiān)讫?吉林大學(xué) 2007

碩士論文
[1]酸性絲氨酸蛋白酶ASPNJ抗急性淋巴細(xì)胞白血病Jurkat細(xì)胞作用與膜蛋白表達(dá)相關(guān)機(jī)制[D]. 張建一.吉林大學(xué) 2016
[2]酸性絲氨酸蛋白酶對淋巴細(xì)胞白血病Jurkat細(xì)胞的抑制作用及可能的機(jī)制[D]. 李春花.吉林大學(xué) 2015
[3]酸性絲氨酸蛋白酶抗白血病細(xì)胞作用機(jī)制的研究[D]. 姜雪.吉林大學(xué) 2014
[4]酸性絲氨酸蛋白酶ASPNJ抑制急性髓細(xì)胞白血病NB4細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 葛鑫.吉林大學(xué) 2012



本文編號：3328002