背景:腎癌是常見的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤,中位無進(jìn)展生存期較低。舒尼替尼是治療晚期腎癌最有效的藥物之一,雖然舒尼替尼治療腎癌已經(jīng)被視為常規(guī)方案,但是由于副作用和耐藥的出現(xiàn),總體上仍然未能明顯提高患者生存率。因此,尋找新的、更有效的治療腎癌的方法意義重大。目的:在本研究中,以腎癌786-O細(xì)胞為研究對象,首先利用慢病毒介導(dǎo)miR-143過表達(dá)后檢測細(xì)胞遷移、增殖和侵襲能力的改變,接著檢測舒尼替尼處理細(xì)胞后miR-143表達(dá)變化,進(jìn)而探討舒尼替尼調(diào)控miR-143對腎癌細(xì)胞遷移、增殖和侵襲的影響及可能的機(jī)制。方法:將miR-143mimics、miR-NC慢病毒原液分別稀釋10倍、100倍、1000倍、10000倍后侵染293T細(xì)胞,72h后熒光顯微鏡下計(jì)數(shù)熒光細(xì)胞,結(jié)合病毒稀釋倍數(shù)計(jì)算病毒滴度;將miR-143mimics、miR-NC慢病毒穩(wěn)轉(zhuǎn)入腎癌786-O細(xì)胞,qRT-PCR檢測miR-143相對表達(dá)量;用濃度為0、2、4、6、8、10、12μmol/L的舒尼替尼處理786-O細(xì)胞48h,計(jì)算舒尼替尼作用于786-O細(xì)胞48h的IC50值,選取該值作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)加藥濃度;用IC50值濃度的... 

【文章來源】：蚌埠醫(yī)學(xué)院安徽省

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

miR-143穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的構(gòu)建（A：白光下觀察；B：熒光顯微鏡下觀察；C：熒光定量PCR檢測miR-143相對表達(dá)量

實(shí) 驗(yàn) 結(jié) 果 1.慢病毒滴度復(fù)核 將 miR-143mimics 慢病毒懸液、miR-NC 慢病毒懸液分別稀釋 10 倍、100 倍、1000 倍、10000 倍，侵染 293T 細(xì)胞 72h 后，于倒置熒光顯微鏡下觀察熒光分布情況。結(jié)果顯示，兩組慢病毒懸液的熒光表達(dá)均較強(qiáng)，通過計(jì)數(shù)熒光細(xì)胞數(shù)結(jié)合病毒稀釋倍數(shù)，計(jì)算可得 miR-143mimics、miR-NC 的滴度均大于 1×108TU/ml，病毒滴度符合實(shí)驗(yàn)要求，可以進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)（圖 1）。 病毒稀釋倍數(shù)： 10-1 10-2 10-3 10-4

Mtt法檢測IC50值

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]低表達(dá)DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3b（DNMT3b）基因?qū)Π螂装┘?xì)胞生長和阿霉素耐藥性影響的體內(nèi)外研究[D]. 陳柯.南方醫(yī)科大學(xué) 2016
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本文編號：3324298