研究背景肝癌是第六常見的癌癥,同時致死率排名第三,每年有超過700000人被診斷為肝癌,平均每10萬人的發(fā)病人數(shù)為16。肝癌患者的五年生存率約為5-9%,而導致生存率低的原因主要是因為肝癌發(fā)現(xiàn)時多數(shù)已經(jīng)處于晚期。通常情況下約70-90%肝癌的發(fā)生都與慢性肝臟內疾病的發(fā)生有關,大約有80%的肝癌發(fā)生在東亞以及撒哈拉以南非洲地區(qū),而這主要與慢性乙肝病毒感染以及黃曲霉素B的攝入有關。而在北美,歐洲以及日本,慢性丙肝病毒感染是肝癌發(fā)生的主要危險因素,其次是飲酒。肝癌的發(fā)生是一個復雜的過程,與多種突變以及信號通路改變有關,其中最常見的基因突變是抑癌基因TP53的失活突變,大約有20-40%的肝癌病人有TP53的基因突變,并且其突變頻率與肝癌的發(fā)展階段有關。CTNNB1,編碼βcatenin,發(fā)生突變的概率約為25%,主要在HCV相關的肝癌中出現(xiàn)。同時在染色體1q,6p,8q,17q和20q發(fā)生的基因擴增以及4q,8p,11q,13q,16q和17p的片段缺失突變在肝癌中較為常見,它們影響了一些重要的致癌基因和抑癌基因。表皮生長因子受體EGFR及Ras信號通路在超過50%的肝癌患者中都被激活,而m... 

【文章來源】：武漢大學湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１肝癌患者腫瘤組織和癌旁組織ｍｉＲ－１４６ａ表達水平

為了進一步驗證ｍｉＲ－１４６ａ是否在肝癌中呈表達下調，本文選擇了肝癌細胞??系ＬＭ３，?ＱＧＹ－７７０１，ＳＭＭＣ－７７２１，?ＨｅｐＧ２以及正常肝細胞系Ｌ０２進行驗證。??采用熒光定量ＰＣＲ對上述細胞系ｍｉＲ－１４６ａ表達進行檢測，結果如圖３所示，??ｍｉＲ－１４６ａ在正常肝細胞系Ｌ０２以及ＬＭ３中表達較高，而在肝癌細胞系ＨｅｐＧ２，??ＳＭＭＣ－７７２１和ＱＧＹ－７７０１中表達較低，表明部分肝癌細胞系如ＨｅｐＧ２?，??１２??

．所用的統(tǒng)計數(shù)據(jù)均使用ＳＰＳＳ?１９．０進行分析，數(shù)據(jù)均重復測量上次，表示方??均為ｒｎｅａｎＳ±ＳＤ，獨立樣品均采用ｔ校驗進行分析。ＰＣ０．０５被認為是具有顯著??性差異。??３?？結果??３．１?ｍｉＲ－１４６ａ在肝癌細胞系ＨｅｐＧ２和ＳＭＭＣ－７７２１中的穩(wěn)定表達檢測??將ＨｅｐＧ２和ＳＭＭＣ－７７２１細胞按照５ｘｌ〇５／孔鋪板在六孔板中，待細胞鋪滿??底部３０－５０％即進行慢病毒轉染，分別在六孔板不同的孔中加入ｌｍＬｍｉＲ－１４６ａ，??或者ｌｍＬ?ＰＬＫ０．１慢病毒以及終濃度８ｕｇ／ｍＬ的Ｐｏｌｙｂｒｅｎｅ，并在病毒感染２４ｈ過??后加入ｌｕｇ／ｕＬ的ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ進行篩選，繼續(xù)培養(yǎng)７２ｈ后米用ＴＲｉｚｏｌ試劑收細胞??品的總ＲＮＡ，然后采用熒光定量ＰＣＲ對ｍｉＲ－１４６ａ的表達進行檢測，如圖４??所示，結果表明，在ＨｅｐＧ２和ＳＭＭＣ－７７２１細胞中穩(wěn)定轉染ｍｉＲ－１４６ａ后，與感??染ＰＬＫ０．１以及親代細胞相比，ｍｉＲ－１４６ａ表達明顯上調（＊ｐ＜０．０５）。??Ｈｅｐ２－

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Hepatocellular carcinoma,human immunodeficiency virus and viral hepatitis in the HAART era[J]. Douglas C Macdonald,Mark Nelson,Mark Bower,Thomas Powles.  World Journal of Gastroenterology. 2008(11)



本文編號：3317588