肝細(xì)胞肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC,簡稱肝癌）是全世界范圍內(nèi)常見的惡性腫瘤之一。盡管HCC在手術(shù)治療、放化療以及分子靶向治療等方面取得了很大進(jìn)展,但由于其高侵襲、高轉(zhuǎn)移及高復(fù)發(fā)等特性,HCC患者預(yù)后差的現(xiàn)狀仍未發(fā)生根本改變。截止目前肝癌發(fā)生發(fā)展的確切分子機(jī)制尚不完全清楚。因此,探討HCC侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制,并尋找有效的治療靶點(diǎn)以及早期診斷和預(yù)后預(yù)測(cè)的生物標(biāo)志物是目前HCC研究的重要方向。近年來的研究發(fā)現(xiàn),長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA,lncRNA）在包括肝癌在內(nèi)的多種腫瘤中異常表達(dá),在肝癌的發(fā)生與發(fā)展過程中發(fā)揮著促癌基因或抑癌基因的重要作用。在本研究中,我們重點(diǎn)對(duì)一個(gè)新的、在肝細(xì)胞肝癌中表達(dá)上調(diào)的lncRNA LINC02163進(jìn)行研究,分析其在肝癌組織及肝癌細(xì)胞中的表達(dá)和臨床意義,研究其生物學(xué)功能及可能的作用機(jī)制。具體內(nèi)容如下:第一部分LINC02163的分子特征以及在肝細(xì)胞肝癌組織中的表達(dá)和臨床意義目的:分析LINC02163的分子特征,研究LINC02163在肝細(xì)胞肝癌組織中的表達(dá)及其與肝癌患者臨床病理參數(shù)和預(yù)后的關(guān)聯(lián)... 

【文章來源】：中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

LINC02163的分子特征和編碼能力

hthatoflncRNA(MALAT1)andmRNA(GAPDH,β-actin).(D)TheORFpredictiveresultsofLINC02163gene.1.2.2目的基因LINC02163和內(nèi)參基因β-actin引物的驗(yàn)證結(jié)果目的基因LINC02163及內(nèi)參基因β-actin引物合成完成后，我們用qRT-PCR驗(yàn)證了這兩對(duì)引物效果和特異性。觀察LINC02163及β-actin的擴(kuò)增曲線與擴(kuò)增產(chǎn)物的熔解曲線結(jié)果（圖1-2），可以看出LINC02163及β-actin的擴(kuò)增曲線有完整的指數(shù)增長期和非指數(shù)平臺(tái)期，對(duì)應(yīng)的熔解曲線在同一熔解溫度上有一特異峰，提示設(shè)計(jì)的引物效果和特異性較好，達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求，可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。圖1-2LINC02163與β-actin的擴(kuò)增曲線和熔解曲線。Figure1-2:AmplificationandmeltingcurvesofLINC02163andβ-actin.1.2.3LINC02163在肝癌組織中的表達(dá)情況我們利用qRT-PCR檢測(cè)和分析60例肝癌以及其配對(duì)癌旁肝組織標(biāo)本中LINC02163的差異表達(dá)情況，用β-actin作為內(nèi)參基因?qū)δ康幕騆INC02163的表達(dá)量進(jìn)行校正。結(jié)果表明：與配對(duì)癌旁組織相比，LINC02163在肝癌組織中的表達(dá)明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001，圖1-3A）。為了進(jìn)一步證實(shí)我們結(jié)果，我們利用生物信息學(xué)軟件starBase（http://starbase.sysu.edu.cn/）查詢TCGA肝細(xì)胞肝癌數(shù)據(jù)庫中的LINC02163基因表達(dá)情況，starBase上分析的結(jié)果與本實(shí)驗(yàn)組織樣本的結(jié)果一致（圖1-3B）。

陸軍軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文20圖1-3：LINC02163在肝癌組織與肝組織中的基因表達(dá)量。（A）qRT-PCR檢測(cè)分析肝癌組織（n=60）與其配對(duì)癌旁組織（n=60）中LINC02163的表達(dá)量。用ΔΔCt值顯示LINC02163的表達(dá)水平（ΔCt=CtLINC02163－Ctβ-actin，ΔΔCt=ΔCt實(shí)驗(yàn)組－ΔCt對(duì)照組）。ΔΔCt值越高，表達(dá)量越高。***，Wilcoxon符號(hào)秩檢驗(yàn)，P<0.001。（B）TCGA肝細(xì)胞肝癌數(shù)據(jù)庫中的肝癌組織（n=374）與正常肝組織（n=50）LINC02163的表達(dá)量。Figure1-3:TheexpressionofLINC02163inHCCandlivertissues.(A)qRT-PCRwasusedtodetectandanalyzetherelativeexpressionlevelofLINC02163inHCCtissues(n=60)andpairedadjacenttissues(n=60).ΔΔCtvalueswereusedtoshowrelativeexpressionlevelofLINC02163(ΔCt=CtLINC02163－Ctβ-actin,ΔΔCt=ΔCtexperiment－ΔCtcontrol).HigherΔΔCtvaluesindicatehigherexpression.***,Wilcoxonsymbolranktest,P<0.001.(B)LINC02163expressioninHCCtissues(n=374)andnormallivertissues(n=50)inTCGAHCCdatabase.1.2.4LINC02163在肝癌組織中的表達(dá)與肝癌患者臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系我們進(jìn)一步分析了60例HCC患者肝癌組織中LINC02163的表達(dá)與各臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系，以便驗(yàn)證LINC02163在肝癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用。將納入研究的60例病例按照HCC組織的LINC02163相對(duì)表達(dá)量依次排序，并按中位數(shù)方法分為高表達(dá)組及低表達(dá)組各30例。用2檢驗(yàn)分別驗(yàn)證兩組間臨床一般情況及病理參數(shù)有無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果顯示，LINC02163的表達(dá)水平與性別、年齡、肝硬化、AFP表達(dá)水平、腫瘤直徑、數(shù)目、病理分級(jí)等無明顯相關(guān)性，而與腫瘤TNM分期和微血管侵犯（MVI）有顯著的關(guān)聯(lián)（P<0.01，表1-3）。相比臨床早期（Ⅰ～Ⅱ期,

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Downregulation of LncRNAH19 and MiR-675 Promotes Migration and Invasion of Human Hepatocellular Carcinoma Cells through AKT/GSK-3β/Cdc25A Signaling Pathway[J]. 呂軍,馬寧,陳錫林,黃曉卉,汪謙.  Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2014(03)
[2]Risk factors for early recurrence of small hepatocellular carcinoma after curative resection[J]. Yan-Ming Zhou,Jia-Mei Yang,Bin Li,Zheng-Feng Yin,Feng Xu,Bin Wang,Wen Xu and Tong Kan Department of Hepato-Biliary-Pancreato-Vascular Surgery,First Xiamen Hospital,Fujian Medical University,Xiamen 361003,China;Department of Special Treatment,Department of Molecular Oncology,Department of Pathology,Eastern Hepatobiliary Surgery Hospital,Second Military Medical University,Shanghai 200438,China.  Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2010(01)



本文編號(hào)：3314340