全世界癌癥發(fā)病率和死亡率正在急速增加中,在女性中,乳腺癌是最常診斷出的癌癥,是女性中與腫瘤相關(guān)死亡的主要因素。三陰性乳腺癌是指HER-2、PR和ER蛋白均為陰性的乳腺癌,占全部乳腺癌的10%-20%。三陰性乳腺癌與其他亞型乳腺癌相比具有生存率低、惡性化水平更高、易于復(fù)發(fā)、產(chǎn)生耐藥、發(fā)生轉(zhuǎn)移和發(fā)病年輕化等特點(diǎn),加之TNBC缺乏在其他類(lèi)型的乳腺腫瘤中表達(dá)的可靶向受體,因此治療這種高度侵襲性乳腺癌極具有挑戰(zhàn)性。內(nèi)皮細(xì)胞特異性分子1（ESM1）是一種可在血液中自由循環(huán)的硫酸皮膚蛋白多糖�，F(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn),ESM1在肺癌、子宮癌、腎癌、肝癌、腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、乳腺癌等腫瘤中明顯高表達(dá),并且已有證據(jù)表明ESM1直接參與腫瘤進(jìn)展,對(duì)頭頸部癌、胃癌、鼻咽癌、大腸癌和肝癌細(xì)胞的增殖和遷移有顯著影響。最近研究結(jié)果顯示,ESM1可作為三陰性乳腺癌預(yù)后標(biāo)志物。因而探究ESM1在三陰性乳腺癌中的作用及機(jī)制具有重要意義。本研究旨在探討ESM1在三陰性乳腺癌中增殖、遷移以及侵襲作用和其潛在的機(jī)制。我們應(yīng)用人三陰性乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231和MDA-MB-468,構(gòu)建穩(wěn)定敲低的ESM1細(xì)胞系和瞬時(shí)過(guò)表達(dá)ESM1,應(yīng)用... 

【文章來(lái)源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：69 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【圖文】：

ESM1在乳腺癌不同癌癥階段以及不同亞型中的表達(dá)；TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中表達(dá)高或低ESM1水平的TNBC患者的無(wú)復(fù)發(fā)生存期（RFS）的Kaplan-Meier曲線

華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2017屆碩士研究生學(xué)位（畢業(yè)）論文28MDA-MB-231中穩(wěn)定敲低內(nèi)皮細(xì)胞特異性分子-1，我們構(gòu)建了pGreenPuro-shESM1載體和pGreenPuro對(duì)照空載體，pGreenPuro-ESM1shRNA和pGreenPuro-Control質(zhì)粒被VSV-G和GAG-POL質(zhì)粒包埋并感染293T細(xì)胞，并收集病毒液感染MDA-MB-231細(xì)胞，2ug/ml終濃度嘌呤霉素持續(xù)篩選三天，擴(kuò)增存活細(xì)胞并分析ESM1mRNA表達(dá)和蛋白質(zhì)表達(dá)，如圖2A和2B所示。通過(guò)熒光定量PCR和westernblot檢測(cè)，三個(gè)shRNA都能顯著抑制ESM1的表達(dá)。最終我們選擇了敲低效率最高的shRNA1序列（圖2C），并用于進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。圖3-2實(shí)時(shí)熒光定量PCR和蛋白質(zhì)印記檢測(cè)ESM1敲低效率和過(guò)表達(dá)效A-B，通過(guò)蛋白質(zhì)印跡和qRT-PCR檢查了ESM1的shRNA在MDA-MB-231細(xì)胞中的敲低效率；C，通過(guò)westernblot驗(yàn)證ESM1敲低效率。D，通過(guò)westernblot檢查ESM1過(guò)表達(dá)的作用。Fig3-2Real-timePCRandwesternblottocheckESM1knockdownefficiencyandoverexpressionefficiencyA-B,EffectsofshRNAknockdownofESM1onMDA-MB-231werecheckedbywesternblotandqRT-PCR;

華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2017屆碩士研究生學(xué)位（畢業(yè)）論文30圖3-3敲低ESM1抑制MDA-MB-231細(xì)胞增殖、遷移、侵襲以及克隆形成。A，CCK8檢測(cè)細(xì)胞增殖能力變化；B，平板克隆形成實(shí)驗(yàn)C，Transwell檢測(cè)細(xì)胞遷移能力；D，Transwell檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力Fig.3-3ESM1knockdowndecreasescellproliferation,migration,invasionandcolonyformationonMDA-MB-231.A,CCK8detectsCellproliferationassay;B,Colonyformationassay.C,TranswelldetectsCellmigrationassay;D,TranswelldetectsCellinvasionassay;3.4shESM1抑制MDA-MB-468細(xì)胞增殖、遷移和侵襲MDA-MB-468細(xì)胞和MDA-MB-231細(xì)胞一樣同為三陰性乳腺癌細(xì)胞，不同的是，MDA-MB-231細(xì)胞是高度侵襲的細(xì)胞，MDA-MB-468是中度侵襲的細(xì)胞。此前我們成功證明了shESM1抑制MDA-MB-231細(xì)胞增殖、遷移和侵襲。為了進(jìn)一步探索ESM1在三陰性乳腺癌中的作用，我們選擇了三陰性乳腺癌MDA-MB-468細(xì)胞并成功構(gòu)建了穩(wěn)定敲低的shESM3細(xì)胞系。（圖4A）。然后，使用MDA-MB-468ESM1敲低細(xì)胞和對(duì)照組細(xì)胞來(lái)檢查細(xì)胞增殖，遷移和侵襲的能力（圖4B-4C）。就如同在MDA-MB-231的結(jié)果一樣，當(dāng)在MDA-MB-468細(xì)胞中用shRNA敲低ESM1時(shí)，明顯看到MDA-MB-468細(xì)胞在體外的增殖，

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Interleukin-8 associates with adhesion,migration,invasion and chemosensitivity of human gastric cancer cells[J]. Wen-Xia Kuai,Department of Pediatrics,Huaian First Hospital Affiliated to Nanjing Medical University,Huaian 223300,Jiangsu Province,China Qiong Wang,Xiao-Zhong Yang,Department of Digestion,Huaian First Hospital Affiliated to Nanjing Medical University,Huaian 223300,Jiangsu Province,China Yao Zhao,Ren Yu,Xiao-Jun Tang,Department of Gastrointestinal Surgery,Huaian First Hospital Affiliated to Nanjing Medical University,Huaian 223300,Jiangsu Province,China.  World Journal of Gastroenterology. 2012(09)



本文編號(hào)：3309803