背景:肺癌是世界范圍內(nèi)的惡性腫瘤之一,是男性癌癥死亡的主要原因,也是世界范圍內(nèi)女性癌癥死亡的第二大原因。多年來,外科、化療、放療和靶向治療已被廣泛應(yīng)用于臨床,然而,肺癌的總體生存率仍然不理想。如今,肺癌治療的革命正在努力改變這種狀況,免疫抑制劑（ICIs）細(xì)胞免疫治療將成為肺癌治療的新的突破點(diǎn)。循環(huán)腫瘤浸潤性淋巴細(xì)胞（Circulation Tumor infiltrating lymphocytes,CTIL）是一類存在于外周血中腫瘤浸潤性且具有抗原效應(yīng)的細(xì)胞群,包括T細(xì)胞、B細(xì)胞和NK細(xì)胞,大量研究證明增加CTILs一直與不同的人類腫瘤的臨床治療效果良好結(jié)果一致。近年來,有大量的實(shí)驗(yàn)組對肺癌進(jìn)行了全基因組測序,篩選出了許多在肺癌發(fā)生中差異表達(dá)的基因,這些基因?qū)Ψ伟┑陌l(fā)生發(fā)展起一定的調(diào)節(jié)作用。盡管人們發(fā)現(xiàn)了很多在肝癌中差異表達(dá)的基因,但還是有很多起重要調(diào)節(jié)作用的基因未被發(fā)現(xiàn)。目的:本課題擬探討CTIL中CD28和CD27單克隆抗體在肺癌患者免疫治療中的作用,以及肺癌患者外周血中相關(guān)細(xì)胞的表達(dá)變化,以及通過高通量測序技術(shù)篩選出在肺癌發(fā)生發(fā)展中起作用的特異性基因,為肺癌的診斷和治療提供新... 

【文章來源】：魯東大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
第1章 前言
    1.1 研究背景
        1.1.1 肺癌簡介
        1.1.2 CTIL在治療肺癌的研究
        1.1.3 肺癌基因組學(xué)研究
    1.2 研究目的
    1.3 總結(jié)
第2章 循環(huán)腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞在肺癌治療上的作用及相關(guān)特異性基因
    2.1 CTIL免疫治療方法
        2.1.1 CTIL簡介和作用機(jī)制
        2.1.2 TIL作為癌癥診斷標(biāo)準(zhǔn)
            2.1.2.1 TILs能夠在早期和晚期預(yù)測患者
            2.1.2.2 TILs是一種重要的預(yù)后標(biāo)志
        2.1.3 腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞(TILs)臨床治療
    2.2 CD27在腫瘤免疫調(diào)節(jié)中的作用
        2.2.1 CD27
        2.2.2 CD27對T細(xì)胞活化
        2.2.3 CD27/CD70共刺激系統(tǒng)與癌癥免疫
    2.3 CD28在腫瘤免疫調(diào)節(jié)中的作用
        2.3.1 CD28
        2.3.2 CD28協(xié)同刺激T細(xì)胞激活
    2.4 IncRNA在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的調(diào)控
第3章 材料和方法
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)樣品
        3.1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.3 主要試驗(yàn)試劑
        3.1.4 引物序列
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 血細(xì)胞分析
        3.2.2 LD001樣品CTIL細(xì)胞體外培養(yǎng)和回輸
        3.2.3 CT圖分析
        3.2.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測
        3.2.5 RNA提取
        3.2.6 逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測
        3.2.7 Real-timePCR檢測
        3.2.8 高通量測序長鏈非編碼RNA
        3.2.9 引物序列設(shè)計(jì)
        3.2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
第4章 結(jié)果與分析
    4.1 CT統(tǒng)計(jì)結(jié)果
        4.1.1 腫瘤1統(tǒng)計(jì)分析
        4.1.2 腫瘤2統(tǒng)計(jì)分析
        4.1.3 腫瘤3統(tǒng)計(jì)分析
        4.1.4 腫瘤4統(tǒng)計(jì)分析
        4.1.5 腫瘤5統(tǒng)計(jì)分析
        4.1.6 小結(jié)
    4.2 流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果
        4.2.1 T淋巴細(xì)胞的比例變化
        4.2.2 CD4+T的細(xì)胞比例
        4.2.3 CD8+T的細(xì)胞比例
            4.2.3.1 CD28+的細(xì)胞比例
            4.2.3.2 CD27+的細(xì)胞比例
        4.2.4 CD56+NK細(xì)胞的比例
    4.3 RNA提取結(jié)果分析
    4.4 血細(xì)胞分析結(jié)果
    4.5 高通量測序結(jié)果
        4.5.1 數(shù)據(jù)產(chǎn)出情況
        4.5.2 Reads與參考基因組比對情況統(tǒng)計(jì)
        4.5.3 差異表達(dá)量分析
            4.5.3.1 比較組之間差異表達(dá)基因分布
            4.5.3.2 差異表達(dá)基因火山圖
            4.5.3.3 差異表達(dá)基因聚類圖
        4.5.4 確定差異表達(dá)基因,設(shè)計(jì)引物序列
            4.5.4.1 通過蛋白互作網(wǎng)絡(luò)分析確定候選基因
            4.5.4.2 確定差異表達(dá)基因
    4.6 候選基因驗(yàn)證結(jié)果
        4.6.1 逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測
        4.6.2 Real-timePCR檢測
第5章 結(jié)果與討論
    5.1 CT腫瘤組織大小統(tǒng)計(jì)結(jié)果
    5.2 流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果
    5.3 特異性突變基因的篩選與鑒定
    5.4 討論
參考文獻(xiàn)
附錄A 實(shí)驗(yàn)儀器
附錄B 實(shí)驗(yàn)試劑
附錄C 常用緩沖液及試劑的配置
附錄D RNA提取的方法
附錄E 瓊脂糖凝膠電泳
作者簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Pan-negative型非小細(xì)胞肺癌的研究進(jìn)展[J]. 孫麗,熊志成,韓琤波.  中國肺癌雜志. 2018(02)
[2]2013年中國惡性腫瘤發(fā)病和死亡分析[J]. 陳萬青,鄭榮壽,張思維,曾紅梅,鄒小農(nóng),赫捷.  中國腫瘤. 2017(01)
[3]TIL腫瘤過繼細(xì)胞治療研究進(jìn)展[J]. 陳晚華,劉輝,汪畢,錢其軍.  中國腫瘤生物治療雜志. 2012(06)
[4]CD28分子的研究進(jìn)展[J]. 郝秀麗,張逢春.  北華大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2004(02)



本文編號：3293521