目的:探討乙型肝炎病毒X蛋白誘導(dǎo)上皮細(xì)胞間質(zhì)化轉(zhuǎn)變和肝細(xì)胞肝癌進(jìn)程的機(jī)制及SIP1在其中發(fā)揮的作用。方法:1、pHBx質(zhì)粒轉(zhuǎn)染SMMC-7721細(xì)胞與HepG2細(xì)胞后,運(yùn)用Transwell實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞遷移能力變化,檢測細(xì)胞中SIP1及EMT相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。2、構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)HBx蛋白的肝癌細(xì)胞株HepG2-X,運(yùn)用Trasnwell實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞遷移能力變化,運(yùn)用Western-blot、qPCR及免疫熒光技術(shù)檢測細(xì)胞SIP1及EMT相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。3、siHBx質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HepG-X細(xì)胞,或者在表達(dá)HBx的HepG2細(xì)胞中敲減SIP1,用Western-blot驗(yàn)證HBx及SIP1敲減情況并檢測相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。4、用質(zhì)粒pRL-PK與pGL3-Basic或pGL3-E-cadherin-luc共轉(zhuǎn)染由HBx處理的肝癌細(xì)胞系,酶標(biāo)儀檢測相對熒光素活性。5、HBX轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞12、24、36及48h后,用q-PCR檢測各時(shí)間點(diǎn)E-cadherin mRNA的變化,選取mRNA發(fā)生明顯變化的時(shí)間作為最佳時(shí)間點(diǎn),用ChIP檢測該時(shí)間點(diǎn)的E-cadherin基因啟動子與SIP1結(jié)... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

WesternBlot檢測HBx對肝癌細(xì)胞細(xì)胞HepG2中E-cadherin(上皮細(xì)胞標(biāo)志物),Vimentin和N-cadherin(間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物)表達(dá)水平的影響.

26BX 對肝癌細(xì)胞細(xì)胞 SMMC-7721 中adherin and Vimentin in SMMC-t analysis.rin 和Vimentin的mRNA水平，A 水平降低，而 Vimentin 的 發(fā)現(xiàn) HBx 的引入能夠使細(xì)胞中 1.4)。

細(xì)胞 HepG2 轉(zhuǎn)染 pHBX 后 E-cadherins of E-cadherin and Vimentin in Hepime RT-PCR analysis.

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Hepatitis B virus X protein accelerates the development of hepatoma[J]. Xiao-Dong Zhang,Yuan Wang,Li-Hong Ye.  Cancer Biology & Medicine. 2014(03)
[2]Hepatitis B virus,HBx mutants and their role in hepatocellular carcinoma[J]. Ashraf Ali,Hany Abdel-Hafiz,Mohd Suhail,Amany Al-Mars,Mohammad Khalid Zakaria,Kaneez Fatima,Sultan Ahmad,Esam Azhar,Adeel Chaudhary,Ishtiaq Qadri.  World Journal of Gastroenterology. 2014(30)
[3]肝纖維化病理過程中ZEB1和ZEB2的動態(tài)表達(dá)變化及意義[J]. 韓冰,謝汝佳,洪琴,張成俊,楊勤,程明亮.  中國病理生理雜志. 2012(09)



本文編號：3291172