發(fā)布時(shí)間：2021-07-18 13:58

　　第一部分磷酸化i TRAQ技術(shù)篩選a PKC-ι直接磷酸化底物Sp1（Ser59）目的:檢測(cè)aPKC-ι的直接磷酸化底物及位點(diǎn),探討aPKC-ι調(diào)控膽管癌上皮-間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化（EMT）及免疫抑制的分子機(jī)制。方法:將a PKC-ι-c DNA表達(dá)載體轉(zhuǎn)導(dǎo)入人膽管癌細(xì)胞系中,構(gòu)建穩(wěn)定過(guò)表達(dá)a PKC-ι的人膽管癌細(xì)胞系并設(shè)置為實(shí)驗(yàn)組,對(duì)照組為空轉(zhuǎn)病毒組。應(yīng)用基于磷酸化i TRAQ（Isobaric tag for relative and absolute quantitation,i TRAQ）技術(shù)的定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究,篩選出差異表達(dá)的磷酸化位點(diǎn)、肽段及蛋白質(zhì),并進(jìn)行生物信息學(xué)分析,如GO分析、KEGG富集分析、蛋白質(zhì)互作網(wǎng)絡(luò)分析等。選取參與EMT過(guò)程的相關(guān)信號(hào)通路中差異表達(dá)的磷酸化蛋白位點(diǎn),應(yīng)用WB、IF進(jìn)行驗(yàn)證;結(jié)合免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)（Co-IP）檢測(cè)該磷酸化蛋白在膽管癌組織及細(xì)胞中與a PKC-ι的相互結(jié)合關(guān)系,論證其是否為a PKC-ι的直接磷酸化底物。結(jié)果:定量磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)研究發(fā)現(xiàn),穩(wěn)定過(guò)表達(dá)aPKC-ι的膽管癌細(xì)胞與未經(jīng)任何處理的膽管癌細(xì)胞相對(duì)比,共有311個(gè)差異表達(dá)的磷酸化肽... 

【文章來(lái)源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：123 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

EMT在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中處于起始和核心環(huán)節(jié)[7]

iTRAQ實(shí)驗(yàn)流程

中 科 技 大 學(xué) 博 士 學(xué) 位 aPKC-ι表達(dá)是否上調(diào)。結(jié)果所示，慢病毒轉(zhuǎn)染效率約TFK-1-aPKC-ι-cDNA 和 HuCCT-1-aPKC-ι-cDNA 細(xì)胞高于空轉(zhuǎn)病毒組及空白組（見(jiàn)圖 1-3），提示轉(zhuǎn)染成功

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Correlation of aPKC-ι and E-cadherin expression with invasion and prognosis of cholangiocarcinoma[J]. Qiang Li, Jian-Ming Wang, Cong Liu, Bao-Lai Xiao, Jin-Xi Lu and Sheng-Quan ZouAuthor Affiliations: Department of General Surgery , and Department of Pathology , Tongji Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, China.  Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2008(01)



本文編號(hào)：3289712