研究背景肺癌是最常見的惡性腫瘤之一,非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）約占所有肺癌病例的85%,NSCLC主要包括肺腺癌（LUAD）和鱗狀細(xì)胞癌（SCC）。在NSCLC病例中,LUAD患者約占60%,復(fù)發(fā)率高且5年總生存率很低是引起肺腺癌死亡率高的主要原因。因此,篩選關(guān)鍵作用因子并闡明其在LUAD發(fā)展中的作用機(jī)制,對LUAD防治至關(guān)重要。支鏈氨基酸轉(zhuǎn)氨酶1（BCAT1）與人類多種惡性腫瘤相關(guān),研究表明BCAT1在胃癌、結(jié)直腸癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、肝癌等多種腫瘤組織中高表達(dá),并且BCAT1的高表達(dá)與多種癌癥的預(yù)后不良、腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲密切相關(guān)。我們對臨床LUAD樣本檢測發(fā)現(xiàn)BCAT1在癌組織中高表達(dá),表明BCAT1很可能參與了 LUAD的發(fā)展,因此,本項目擬研究BCAT1在LUAD發(fā)展中的作用機(jī)制,為臨床LUAD診斷與治療提供實驗依據(jù)。研究目的本研究旨在闡明體外條件下BCAT1對肺腺癌發(fā)展的影響及其作用機(jī)制。研究方法1.在包含由93個人類LUAD組織和85個癌旁組織組成的組織芯片中,用免疫組化的方法檢測肺腺癌癌組織及癌旁組織中BCAT1的蛋白表達(dá)水平,染色結(jié)果按強(qiáng)度和陽性率進(jìn)行... 

【文章來源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．１免疫組化法檢測ＢＣＡＴ１在人肺腺癌（ＬＵＡＤ）組織中的表達(dá)??（Ａ）組織芯片陣列排列示意圖（左），藍(lán)色代表癌組織，黃色代表癌旁組織

?ＢＣＡＴ１過表達(dá)促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞增殖、遷移與侵襲???證明ＢＣＡＴ１穩(wěn)定過表達(dá)，Ｃｔｒｌ代表過表達(dá)對照Ａ５４９細(xì)胞，ＢＣＡＴ１－０Ｅ代表ＢＣＡＴ１??過表達(dá)的Ａ５４９細(xì)胞。慢病毒ｓｈ］、ｓｈ２、ｓｈ３分別轉(zhuǎn)染Ａ５４９細(xì)胞用來敲低ＢＣＡＴ１??表達(dá)，如圖１．２Ｄ、Ｅ所示，ＷＢ和ｑＰＣＲ在蛋白和ｍＲＮＡ水平驗證ｓｈｌ，ｓｈ２，ｓｈ３??敲低ＢＣＡＴ１表達(dá)的效果，ｓｈＣｔｒｌ代表敲低對照的Ａ５４９細(xì)胞，ｓｈｌ，ｓｈ２，ｓｈ３代表轉(zhuǎn)??入ｓｈｌ，ｓｈ２，ｓｈ３慢病毒的Ａ５４９細(xì)胞。結(jié)合ｑＰＣＲ和ＷＢ結(jié)果，由于ｓｈｌ，?ｓｈ２敲??低效果顯著，因此選擇ｓｈｌ和ｓｈ２做后續(xù)試驗。??Ａ????ＢＣＡＴｌ??ＮＣＩ－Ｈ１９７５?Ａ５４９?ＣＬＩ－５?ＨＣＣ８２７??Ｂ?Ｃ??ｇ?６ｉ?■??－?ｍａｍ?｛；?■??ｐ－Ａｃｔｉｎ?１?２ｊ?ｌ＾Ｈ；??Ｃｔｒｌ?ＢＣＡＴｌ－〇Ｅ?Ｂ?＇?｜?！?ｊ??Ｄ?廠?Ｃｔｒｌ?ＢＣＡＴ１－ＯＥ??Ｅ??〇３?２．５－．??Ｓ?ｐＬ??ｌ２－°－?＞??ＢＣＡＴｌ?＞?１１５．??Ｅ?…??？?Ａ?■＆?＇？０－?ｒ＾－ｉ??［３－Ａｃｔｉｎ?令?『■卞??ｇ?０．５－?｜Ｓ｜?國?Ｊ｜｜??ｓｈＣｔｒｌ?ｓｈｌ?ｓｈ２?ｓｈ３?｜?０．〇ＪＪ＿ＩＪ＿＾Ｐ＿＾Ｐ＿Ｊｉ｜ｌ?＿??ｓｈＣｔｒｌ?ｓｌｉｌ?ｓｈ２?ｓｈ３??圖１．２?ＷＢ、ｑＰＣＲ驗證ＢＣＡＴｌ過表達(dá)及敲低效果??（Ａ）ＷＢ檢測ＢＣＡＴｌ在肺腺癌細(xì)胞系ＮＣＩ－Ｈ１９７５、Ａ５４９、ＣＬＩ－５、ＨＣＣ８２７中的蛋白表達(dá)??水平。（Ｂ）?ＷＢ驗證ＢＣＡＴｌ過表達(dá)效果。（Ｃ）?ｑＰ

照Ａ５４９細(xì)胞以５ｘ１?〇４個細(xì)胞／ｍＬ的密度接種在Ｅ－Ｐｌａｔｅ??１２中，利用實時無標(biāo)記細(xì)胞功能分析儀每５?ｍｉｎ測量一次細(xì)胞阻抗（取決于附??著細(xì)胞的數(shù)量和形狀），持續(xù)７０小時，以監(jiān)測細(xì)胞的增殖情況。如圖】．３Ａ所示，??在０－２８ｈ，?ＢＣＡＴ１過表達(dá)和Ｃｔｒｌ細(xì)胞增殖速率相當(dāng)，２８ｈ之后，ＢＣＡＴ１過表達(dá)??細(xì)胞增殖速率加快，細(xì)胞數(shù)逐漸多于對照細(xì)胞，且差距具有統(tǒng)計學(xué)意義。細(xì)胞??增殖能力的另一個有效測定方法是克隆形成試驗，通過計數(shù)克隆數(shù)量，可對細(xì)??胞的增殖潛力做定量分析。圖１．３Ｂ中的克隆形成測定表明，與對照細(xì)胞相比，??ＢＣＡＴ１過表達(dá)細(xì)胞的克隆形成能力相對提高，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。以上結(jié)??果提示，ＢＣＡＴ１過表達(dá)對Ａ５４９細(xì)胞的增殖有促進(jìn)作用。??Ａ??．．卜…－丨．…１?…，????ＢＣＡＴｌ?－ＯＥ??■４?－?????．?Ｃｔｒｌ?」＊＊??４?－?￣－？?－?．．?：—???????？?ａ?ｔ?．?？Ｔ?．?ｉ?－?－?．?ｉ?．?．?．?ｉ?．?．?，?ｉ?．?．?．?ｉ?．?！?■?■?Ｉ?．?．?．?．?．?．?．?Ｉ?－?．?｜?．．．?｜?．?．?ｉ?■?■?■?ｉ?．?■?Ｉ??（０?？Ｃ?＊？?？＊．？?１＊４?ＴＯ?２Ｂｔ?ＭＯ?？３ｔ?？？?ＳＪ?ＳＳＪ?ｔＳ３??（ｍ?Ｈｏｕｒ）??Ｂ??Ｃｔｒｌ?ＢＣＡＴｌ－ＯＥ??ｌＯＯ－ｉ?＊?＊??＿?＃幢??Ｃｔｒｌ?ＢＣＡＴｌ－ＯＥ??圖１．３?ＢＣＡＴｌ過表達(dá)Ａ５４９細(xì)胞增殖與克隆形成能力檢測??（Ａ）實時細(xì)胞電子傳感系統(tǒng)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]宮頸癌組織中c-myc、bcat1的表達(dá)及其臨床意義[J]. 烏守恒,曾曉峰,王,萍,周穎,林衛(wèi).  四川大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2018(05)
[2]ECA39 is a novel distant metastasis-related biomarker in colorectal cancer[J]. Reigetsu Yoshikawa,Hidenori Yanagi,Yoshinori Fujiwara,Masafumi Noda,Toshihiko Yagyu,Makoto Gega,Tsutomu Oshima,Takehira Yamamura,Haruki Okamura,Yoshiro Nakano,Tomonori Morinaga,Tomoko Hashimoto-Tamaoki.  World Journal of Gastroenterology. 2006(36)



本文編號：3268816