惡性黑色素瘤是最常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率以每年3-5%的速度快速增長。腫瘤細胞上調表面程序性死亡-配體1（programmed cell death-ligand 1,PD-L1）的表達并通過與T細胞表面的程序性死亡蛋白1（programmed cell death 1,PD-1）相互作用引起免疫檢查點反應以逃避免疫監(jiān)視。目前,靶向PD-1/PD-L1的藥物在治療腫瘤包括轉移性黑色素瘤方面展現(xiàn)出很好的前景,但是患者反應率較低,其具體機制尚不清楚。研究發(fā)現(xiàn),PD-L1不僅高表達于多數(shù)腫瘤細胞,也富集于腫瘤細胞分泌的外泌體中,并參與機體免疫系統(tǒng)的抑制。最新研究表明,黑色素瘤細胞PD-L1表達上調,即使在缺乏適應性免疫的情況下仍然促進腫瘤的生長,提示PD-L1除具有免疫抑制作用外,還具有促進腫瘤細胞增殖的能力。我們前期在黑色素瘤細胞系中過表達PD-L1,同樣可以促進細胞的增殖能力。據(jù)此,我們推測腫瘤細胞PD-L1具有促進細胞增殖的能力,其分泌外泌體到微環(huán)境中,所攜帶的PD-L1除參與免疫抑制外,還促進腫瘤細胞的增殖。為了證實我們的推測,本課題首先利用Tamaxifen誘導的Braf

【文章來源】：山東師范大學山東省

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

外泌體的生物發(fā)生及其自母細胞的釋放[19]

33.2.外泌體的形態(tài)和分子組成外泌體的形態(tài)可以通過電子顯微鏡（electronmicroscope，EM）確定，其形態(tài)為杯狀囊泡結構，直徑30-120nm（圖1-2A）。每個外泌體都帶有親本細胞的印記，其內容物包括DNA，mRNA，微小RNA以及酶和可溶性因子，它們均具有生物活性，并且能夠在靶細胞中執(zhí)行功能性應答并重新編程核酸[16,20]（圖1-2B）。此外，TSG101、Alix、HSP70、CD9、CD63和CD81是在外泌體中高度富集的特異性蛋白，常被用作鑒定外泌體的標記物[21]。以上為一般外泌體的特征，腫瘤外泌體具有自己的獨特性，其分子貨物部分來源于親代腫瘤細胞的表面[22]。由于癌細胞傾向于表達和利用各種免疫抑制分子來鈍化抗腫瘤免疫反應[23]，腫瘤來源的外泌體富含免疫抑制蛋白，包括死亡受體配體（例如FasL或TRAIL），檢查點受體配體（例如PD-L1），抑制性細胞因子（例如IL10和TGF-β1）等。已有文獻報道，轉移性黑色素瘤和前列腺癌的外泌體中富含大量的PD-L1[5,24]。圖1-2外泌體形態(tài)和分子組成[19]Figure1-2Exosomemorphologyandthemolecularcontent[19]山東師范大學碩士學位論文

43.3.外泌體與其細胞靶點的通訊前腫瘤來源的外泌體可以將攜帶前腫瘤的信息傳輸?shù)狡渌麗盒约毎蛘＜毎衃25,26]。外泌體利用以下一種或多種機制與靶細胞相互作用：（a）通過表面分子指導信號傳導以激活細胞內信號傳導；（b）與靶細胞膜融合，然后將蛋白或基因轉移到細胞中；（c）調節(jié)外泌體的吞噬作用及內吞；（d）受體介導的內吞作用[27]。圖1-3總結了受體細胞攝取外泌體的各種途徑以及細胞攝取后的結果。圖1-3外泌體通過幾種途徑與靶細胞相互作用[19]。Figure1-3Exosomesmayinteractwithtargetcellsbyoneofseveralpathways[19].3.4.外泌體的純化及表征為了深入了解外泌體的生理功能，外泌體的純化和定量對于滿足基礎研究和臨床應用的需求至關重要。外泌體的純化主要分為五類：基于密度和大小的超速離心（ultracentrifugation，UC）、依賴大小的超濾和體積排阻色譜（sizeexclusionchromatograph，SEC）等、基于密度的密度梯度離心分離以及利用外泌體上特定標記的免山東師范大學碩士學位論文

【參考文獻】：
期刊論文
[1]運用抗PD-L1抗體治療晚期癌癥患者的安全性與療效評價[J]. 姜孝新,Julie R.Brahmer,Scott S.Tykodi,Laura Q.M.Chow.  腫瘤藥學. 2012(03)



本文編號：3266739