膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）最常見、侵襲性最高的原發(fā)性惡性腫瘤,具有復(fù)發(fā)率高、致死率高和治愈率低等特點,目前仍然是神經(jīng)外科領(lǐng)域的一項重大挑戰(zhàn)。盡管近年來在外科手術(shù)、放療、化療、分子靶向治療及腫瘤電場治療（TTFields）等方面都取得了一定的進展,但是膠質(zhì)瘤患者的總體預(yù)后仍不理想。尤其是膠質(zhì)母細胞瘤患者,中位生存期僅約14個月。膠質(zhì)瘤的發(fā)病機制不清給患者的診療帶來了巨大的障礙。因此,深入探索膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展的分子生物學機制,尋找特異性的治療靶點成為當今神經(jīng)外科領(lǐng)域研究的焦點。長鏈非編碼RNA（lnc RNA）是一類長度大于200個核苷酸、無蛋白編碼功能的RNA,能夠在轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后、翻譯、翻譯后等多個水平參與對靶基因的調(diào)控,進而發(fā)揮重要的生物學功能。Lnc RNA的異常表達可以影響膠質(zhì)瘤的形成與進展,并且可以作為潛在的膠質(zhì)瘤診斷及判斷患者預(yù)后的分子標志物和治療靶點。盡管目前已經(jīng)確定了一些在膠質(zhì)瘤中差異表達的lnc RNAs,并對其進行了較為深入的科學研究,但絕大多數(shù)lnc RNAs在膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展過程中的生物學功能和分子機制尚不明確。通過對課題組前期完成的膠質(zhì)瘤基因芯片數(shù)據(jù)進行分析及... 

【文章來源】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學上海市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

LINC00909在10例正常腦組織（NBT）、28例低級別膠質(zhì)瘤（LGG）和74例高級別HGG*:P<0.05**:P<0.01

海軍軍醫(yī)大學碩士學位論文-16-Tumorsize(cm)<557(55.9%)30(58.8%)27(52.9%)0.690≥545(44.1%)21(41.2%)24(47.1%)WHON(%)I8(7.8%)1(2.0%)7(13.7%)0.001II20(19.6%)4(7.8%)16(31.4%)III10(9.8%)6(11.8%)4(7.8%)IV64(62.7%)40(78.4%)24(47.1%)GradeN(%)LGG(WHOI~II)28(27.5%)5(9.8%)23(45.1%)<0.001HGG(WHOIII~IV)74(72.5%)46(90.2%)28(54.9%)三、LINC00909的表達水平與患者生存預(yù)后的相關(guān)性結(jié)合患者的隨訪資料，采用Log-rank檢驗分析LINC00909的表達水平與患者總生存時間的相關(guān)性，并繪制Kaplan-Meier生存曲線（圖1.2）。結(jié)果表明：LINC00909的表達水平與患者的總生存時間呈負相關(guān)，P<0.0001，差異具有統(tǒng)計學意義（圖1.2A）；在低級別膠質(zhì)瘤組和高級別膠質(zhì)瘤組中，LINC00909的表達水平與患者的總生存時間也呈負相關(guān)，P值分別為0.0097和0.0066，差異具有統(tǒng)計學意義（圖1.2B、C）。圖1.2Kaplan–Meier生存曲線及Log-rank檢驗分析LINC00909的表達水平與患者總生存時間的相關(guān)性。將本研究中可能影響患者生存預(yù)后的危險因素納入單因素分析，結(jié)果表明：患者的年齡、腫瘤的WHO分級和LINC00909的表達水平與患者的生存預(yù)后具有相關(guān)性，P值均小于0.05，差異具有統(tǒng)計學意義。將單因素COX回歸分析結(jié)果中P值小于0.05的變量納入多因素COX回歸分析模型中，分析結(jié)果表明：LINC00909的表達水平和腫瘤的WHO分級是影響患者生存預(yù)后的獨立危險因素，P值分別為P=0.003和P<0.001（表1.7）。

海軍軍醫(yī)大學碩士學位論文-26-使用ImageJ軟件分析蛋白條帶灰度值。統(tǒng)計數(shù)值用均數(shù)±標準差表示，多組間差異比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用Tukey法或Dunnett法，兩組間的差異比較采用獨立樣本t檢驗，P值小于0.05認為差異具有統(tǒng)計學意義。實驗結(jié)果一、LINC00909在不同膠質(zhì)瘤細胞系和人星形膠質(zhì)細胞系NHA中的表達情況通過qRT-PCR檢測LINC00909在膠質(zhì)瘤細胞系U118MG、U251、SHG44、A172、U87MG和人星形膠質(zhì)細胞系NHA中的相對表達量，結(jié)果表明：LINC00909在U251、SHG44、A172和U87MG中的表達水平顯著高于NHA細胞，P值均小于0.01，差異具有統(tǒng)計學意義（圖2.1）。圖2.1qRT-PCR檢測LINC00909在膠質(zhì)瘤細胞系U118MG、U251、SHG44、A172、U87MG和人星形膠質(zhì)細胞系NHA中的相對表達量（**:P<0.01）。二、小干擾RNA轉(zhuǎn)染膠質(zhì)瘤細胞系U87MG和U251的干擾效率將上述實驗中LINC00909表達水平相對較高的膠質(zhì)瘤細胞系U87MG和U251作為實驗對象，使用Lipofectamine3000試劑將3條小干擾RNA（si-LINC-1、si-LINC-2、si-LINC-3）和陰性對照序列（si-NC）轉(zhuǎn)染靶細胞，通過qRT-PCR檢測小干擾RNA的干擾效率。實驗結(jié)果表明：3條siRNA均能顯著抑制LINC00909在U87MG和U251中的表達，其中si-LINC-1的干擾效率最高（圖2.2）。因此，我們選擇si-LINC-1轉(zhuǎn)染U87MG和U251細胞進行后續(xù)的體外細胞功能實驗。


本文編號：3243946