膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）最常見(jiàn)、侵襲性最高的原發(fā)性惡性腫瘤,具有復(fù)發(fā)率高、致死率高和治愈率低等特點(diǎn),目前仍然是神經(jīng)外科領(lǐng)域的一項(xiàng)重大挑戰(zhàn)。盡管近年來(lái)在外科手術(shù)、放療、化療、分子靶向治療及腫瘤電場(chǎng)治療（TTFields）等方面都取得了一定的進(jìn)展,但是膠質(zhì)瘤患者的總體預(yù)后仍不理想。尤其是膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者,中位生存期僅約14個(gè)月。膠質(zhì)瘤的發(fā)病機(jī)制不清給患者的診療帶來(lái)了巨大的障礙。因此,深入探索膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展的分子生物學(xué)機(jī)制,尋找特異性的治療靶點(diǎn)成為當(dāng)今神經(jīng)外科領(lǐng)域研究的焦點(diǎn)。長(zhǎng)鏈非編碼RNA（lnc RNA）是一類長(zhǎng)度大于200個(gè)核苷酸、無(wú)蛋白編碼功能的RNA,能夠在轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后、翻譯、翻譯后等多個(gè)水平參與對(duì)靶基因的調(diào)控,進(jìn)而發(fā)揮重要的生物學(xué)功能。Lnc RNA的異常表達(dá)可以影響膠質(zhì)瘤的形成與進(jìn)展,并且可以作為潛在的膠質(zhì)瘤診斷及判斷患者預(yù)后的分子標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)。盡管目前已經(jīng)確定了一些在膠質(zhì)瘤中差異表達(dá)的lnc RNAs,并對(duì)其進(jìn)行了較為深入的科學(xué)研究,但絕大多數(shù)lnc RNAs在膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的生物學(xué)功能和分子機(jī)制尚不明確。通過(guò)對(duì)課題組前期完成的膠質(zhì)瘤基因芯片數(shù)據(jù)進(jìn)行分析及... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)上海市 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

LINC00909在10例正常腦組織（NBT）、28例低級(jí)別膠質(zhì)瘤（LGG）和74例高級(jí)別HGG*:P<0.05**:P<0.01

海軍軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文-16-Tumorsize(cm)<557(55.9%)30(58.8%)27(52.9%)0.690≥545(44.1%)21(41.2%)24(47.1%)WHON(%)I8(7.8%)1(2.0%)7(13.7%)0.001II20(19.6%)4(7.8%)16(31.4%)III10(9.8%)6(11.8%)4(7.8%)IV64(62.7%)40(78.4%)24(47.1%)GradeN(%)LGG(WHOI~II)28(27.5%)5(9.8%)23(45.1%)<0.001HGG(WHOIII~IV)74(72.5%)46(90.2%)28(54.9%)三、LINC00909的表達(dá)水平與患者生存預(yù)后的相關(guān)性結(jié)合患者的隨訪資料，采用Log-rank檢驗(yàn)分析LINC00909的表達(dá)水平與患者總生存時(shí)間的相關(guān)性，并繪制Kaplan-Meier生存曲線（圖1.2）。結(jié)果表明：LINC00909的表達(dá)水平與患者的總生存時(shí)間呈負(fù)相關(guān)，P<0.0001，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖1.2A）；在低級(jí)別膠質(zhì)瘤組和高級(jí)別膠質(zhì)瘤組中，LINC00909的表達(dá)水平與患者的總生存時(shí)間也呈負(fù)相關(guān)，P值分別為0.0097和0.0066，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖1.2B、C）。圖1.2Kaplan–Meier生存曲線及Log-rank檢驗(yàn)分析LINC00909的表達(dá)水平與患者總生存時(shí)間的相關(guān)性。將本研究中可能影響患者生存預(yù)后的危險(xiǎn)因素納入單因素分析，結(jié)果表明：患者的年齡、腫瘤的WHO分級(jí)和LINC00909的表達(dá)水平與患者的生存預(yù)后具有相關(guān)性，P值均小于0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。將單因素COX回歸分析結(jié)果中P值小于0.05的變量納入多因素COX回歸分析模型中，分析結(jié)果表明：LINC00909的表達(dá)水平和腫瘤的WHO分級(jí)是影響患者生存預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，P值分別為P=0.003和P<0.001（表1.7）。

海軍軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文-26-使用ImageJ軟件分析蛋白條帶灰度值。統(tǒng)計(jì)數(shù)值用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組間差異比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用Tukey法或Dunnett法，兩組間的差異比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P值小于0.05認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)結(jié)果一、LINC00909在不同膠質(zhì)瘤細(xì)胞系和人星形膠質(zhì)細(xì)胞系NHA中的表達(dá)情況通過(guò)qRT-PCR檢測(cè)LINC00909在膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U118MG、U251、SHG44、A172、U87MG和人星形膠質(zhì)細(xì)胞系NHA中的相對(duì)表達(dá)量，結(jié)果表明：LINC00909在U251、SHG44、A172和U87MG中的表達(dá)水平顯著高于NHA細(xì)胞，P值均小于0.01，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖2.1）。圖2.1qRT-PCR檢測(cè)LINC00909在膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U118MG、U251、SHG44、A172、U87MG和人星形膠質(zhì)細(xì)胞系NHA中的相對(duì)表達(dá)量（**:P<0.01）。二、小干擾RNA轉(zhuǎn)染膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87MG和U251的干擾效率將上述實(shí)驗(yàn)中LINC00909表達(dá)水平相對(duì)較高的膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87MG和U251作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，使用Lipofectamine3000試劑將3條小干擾RNA（si-LINC-1、si-LINC-2、si-LINC-3）和陰性對(duì)照序列（si-NC）轉(zhuǎn)染靶細(xì)胞，通過(guò)qRT-PCR檢測(cè)小干擾RNA的干擾效率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：3條siRNA均能顯著抑制LINC00909在U87MG和U251中的表達(dá)，其中si-LINC-1的干擾效率最高（圖2.2）。因此，我們選擇si-LINC-1轉(zhuǎn)染U87MG和U251細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)的體外細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)。


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