黑色素瘤是嚴(yán)重危害人類健康的疾病之一,其發(fā)病率和致死率分別占皮膚癌的4%和80%。PD1和CTLA4的阻斷療法在人晚期黑色素瘤患者中療效明顯,但仍有約50%的患者對該類藥物不敏感。因此,深度挖掘潛在的免疫治療靶點,對開發(fā)針對性藥物、提高癌癥治愈率具有重要意義。機體的免疫功能與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),免疫系統(tǒng)對腫瘤細胞有免疫監(jiān)視和清除作用,而腫瘤細胞也會影響免疫系統(tǒng)的免疫應(yīng)答。近年來基因調(diào)控分析用于干細胞和疾病治療方面。通過調(diào)控網(wǎng)絡(luò)比較分析,可篩選特定細胞的關(guān)鍵基因、轉(zhuǎn)錄因子、細胞表面受體和小RNA分子。為研究腫瘤微環(huán)境中主要免疫細胞的調(diào)控特性、CD8⁺T細胞功能異常及功能恢復(fù)的動態(tài)調(diào)節(jié)機制,本文對9種正常免疫細胞、PD1抗體處理前后的功能異常CD8⁺T細胞和黑色素瘤細胞,分別構(gòu)建基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)、轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)和細胞表面受體調(diào)控網(wǎng)絡(luò),并對差異變化的分子進行相關(guān)實驗驗證。結(jié)果如下:1.為研究主要免疫細胞的調(diào)控特性,利用人類轉(zhuǎn)錄因子數(shù)據(jù)庫和調(diào)控網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建方法,對9種人正常免疫細胞（B細胞、CD4⁺T細胞、CD8⁺

【文章來源】：內(nèi)蒙古大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：120 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，引自Gu,ZuguangBmcSystemsBiology2011[53]

韓鵬勇 黑色素瘤浸潤性免疫細胞的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)研究胞核中，染色體分為開放和沉默區(qū)域，染色體的開放區(qū)域代表轉(zhuǎn)錄因子可，如啟動子、增強子、位點控制區(qū)域和絕緣子等[56]，在染色體開放區(qū)域，轉(zhuǎn)DNA序列結(jié)合控制基因表達[57, 58]。測定染色體開放區(qū)域的技術(shù)有ATAC-seq和異的酶對染色體開放區(qū)域進行切割，結(jié)合測序技術(shù)研究染色體開放區(qū)域（圖 操作步驟簡單，需求的細胞少，可重現(xiàn) DNase-seq 技術(shù)的結(jié)果[59]。在 ATACNI-ATAC 可去除線粒體污染。2015 年 Darren A. Cusanovich采用多細胞標(biāo)記6 孔板通過轉(zhuǎn)座酶攜帶的兩種長鏈引物標(biāo)記，借助流式分選 15～25 個細胞到組合標(biāo)記大約 1 萬個單細胞[60]。HowardYChang 在 2015年通過Fludigm公司結(jié)合微流控技術(shù)每孔固定單個細胞，借助自動化進行單個細胞的裂解、轉(zhuǎn)座立了單細胞 ATAC-seq分析平臺[61]。建立染色體開放區(qū)域后，基于轉(zhuǎn)錄因子與特異性，可構(gòu)建基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)[62][64]。

28圖 2.3代表9種免疫細胞類型中特異和共有的轉(zhuǎn)錄因子。Figure 2.3 Unique and overlapping transcription factors between 9 immune cells.

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3242150