研究背景肺癌是當(dāng)今世界嚴(yán)重危害人類健康的惡性腫瘤,已成為我國癌癥相關(guān)死亡的首要原因。小細(xì)胞肺癌（small cell lung cancer,SCLC）約占所有肺癌的13%-15%,具有高度侵襲性,生存期短,預(yù)后極差。盡管小細(xì)胞肺癌最初對化療敏感,但大多數(shù)患者會迅速產(chǎn)生耐藥性,從而導(dǎo)致化療失敗。因此,充分闡明小細(xì)胞肺癌耐藥性的分子機(jī)制對于提高一線化療療效和延長患者的生存有至關(guān)重要的意義。研究目的課題組前期利用基因表達(dá)譜芯片比較分析小細(xì)胞肺癌耐藥細(xì)胞（H69AR）和敏感細(xì)胞（H69）間基因表達(dá)差異,發(fā)現(xiàn)耐藥細(xì)胞株中MYCN的表達(dá)顯著高于敏感細(xì)胞株（2.3倍）,提示MYCN可能參與了 SCLC化療耐藥。本課題通過體外細(xì)胞和體內(nèi)動物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步明確MYCN在SCLC化療耐藥中的作用;通過轉(zhuǎn)錄組測序和生物信息分析尋找MYCN的下游信號分子,探討MYCN參與SCLC化療耐藥的分子機(jī)制,為下一步開展逆轉(zhuǎn)SCLC化療耐藥的研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。研究方法及結(jié)果1.MYCN與小細(xì)胞肺癌多藥耐藥相關(guān)（1）siRNA下調(diào)細(xì)胞中的MYCN,CCK8結(jié)果顯示在MYCN下調(diào)的細(xì)胞中,化療藥物的IC50值明顯降低,藥物的... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：107 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１?ＭＹＣＮ在小細(xì)胞肺癌耐藥細(xì)胞株Ｈ６９ＡＲ的表達(dá)增加??

?博士學(xué)位論文???我們選擇了敏感株Ｈ６９及其對應(yīng)的耐藥株Ｈ６９ＡＲ，不表達(dá)ＭＹＣＮ的Ｈ４４６，以??及表達(dá)ＭＹＣＮ的Ｈ５２６進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。我們隨后在Ｈ６９ＡＲ細(xì)胞中進(jìn)行了??ＭＹＣＮ的免疫熒光檢測，發(fā)現(xiàn)其定位在細(xì)胞核（圖１－２?Ｃ）。??Ａ?ＭＹＣＮ??Ｃ??ＧＡＰＤＨ?Ｈ６９ＡＲ??Ｈ４４６?Ｈ４４６ＤＤＰ?ＭＹ〇Ｎ?ＤＡＰＩ?ＭＥＲＧＥ??ｍｙｃｎ?丨鑛?ｍ??Ｈ６９?Ｈ６９ＡＲ?Ｈ４４６?Ｈ１４６?Ｈ５２６?Ｈ３４５?Ｈ２０９?Ｈ８２??圖１－２?ＭＹＣＮ在小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株中的表達(dá)情況??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?ＭＹＣＮ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｉｎ?ＳＣＬＣ?ｃｅｌｌ?ｌｉｎｅｓ??（Ａ）小細(xì)胞肺癌敏感細(xì)胞株Ｈ４４６和耐藥株Ｈ４４６ＤＤＰ中無ＭＹＣＮ的表達(dá)；（Ｂ）在８種小細(xì)胞??肺癌細(xì)胞株中，僅有Ｈ６９、Ｈ６９ＡＲ以及Ｈ５２６細(xì)胞表達(dá)ＭＹＣＮ；?（Ｃ）?Ｈ６９ＡＲ細(xì)胞的ＭＹＣＮ免??疫熒光實(shí)驗(yàn)顯示ＭＹＣＮ定位在細(xì)胞核中。??３．體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)ＭＹＣＮ的表達(dá)與ＳＣＬＣ細(xì)胞的化療耐藥相關(guān)??３．１下調(diào)ＭＹＣＮ降低ＳＣＬＣ細(xì)胞的化療抵抗??由吉瑪公司設(shè)計(jì)合成三條Ｋ調(diào)ＭＹＣＮ的ｓｉＲＮＡ，按照說明書轉(zhuǎn)染條件將??ｓｉＲＮＡ和ｓｉＮＣ轉(zhuǎn)染進(jìn)Ｈ６９ＡＲ細(xì)胞和Ｈ５２６細(xì)胞，４８ｈ提取總ＲＮＡ，?７２ｈ提取總??蛋白，根據(jù)ｑＲＴ－ＰＣＲ結(jié)果選取了兩條下調(diào)效果較為明顯的小干擾ＲＮＡ，?ｓｉｌｌ７０??（ｓｉＭＹＣＮ＃ｌ）和ｓｉｌ５７６?（ｓｉＭＹＣＮ＃２），序列見上述材料和方法部分。基因干擾??結(jié)果顯示：與ｓｉＮＣ對比，ｓｉＭＹＣＮ組的ＭＹＣＮ顯著下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義??（尸值＜０．００１）（圖?１

?第一章ＭＹＣＮ調(diào)控凋亡途徑影響小細(xì)胞肺癌的化療耐藥???ＡＢＣ??■?ｓｉＮＣ??１．５?ＳｔｌＫ?．Ｓ．ＮＣ?＾?＿?Ｓ１ＮＣ?Ｈ５２６??Ｚ?２：?ｉ?＾２?ＳＩＭＹ（Ｊ４＃１?￡３－＊?２０〇１?ｓｉＭＶＣＷｌ?ｔＳＴ１??ｉｑ．ｒ．?ｉｆｒ?ｎ?ｇ－＾Ｉｉ．??二一；晶?ｕ?ｌｉＬｌＥｊＪ．?ｌｉｉＬ－ＬｉｉＪ．??ＧＡＰＯＨ?垂？?ＡＤＭ?ＣＤＤＰ?ＶＰ１６?ＡＤＭ?ＣＤＤＰ?ＶＰ?１６??圖１－３－１下調(diào)ＭＹＣＮ降低Ｈ６９ＡＲ和Ｈ５２６細(xì)胞的化療抵抗??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３－１?Ｃｈｅｍｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ?ｗｅｒｅ?ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ?ｄｅｃｒｅａｓｅｄ?ａｆｔｅｒ?ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ?ｏｆ?ＭＹＣＮ?ｉｎ??Ｈ６９ＡＲ?ａｎｄ?Ｈ５２６?ｃｅｌｌｓ??（Ａ）ｑＲＴ－ＰＣＲ?和?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ?結(jié)果顯示：ｓｉＲＮＡ?干擾?Ｈ６９ＡＲ?和?Ｈ５２６?中?ＭＹＣＮ?的表達(dá)后，ＭＹＣＮ??的ｍＲＮＡ水平和蛋ｎ水平顯著下降。（．Ｂ，Ｃ）ＣＣＫ８結(jié)果顯示：在Ｈ６９ＡＲ和Ｈ５２６中下調(diào)ＭＹＣＮ??的表達(dá)后，其［Ｃ５０值顯著下降。＊，尸＜０．０５；?＊＊，Ｐ?＜?０．０１：?＊＊＊，尸＜?０．００１??３．２上調(diào)ＭＹＣＮ增加ＳＣＬＣ細(xì)胞的化療抵抗??由蘇州吉瑪公司設(shè)計(jì)合成ＭＹＣＮ過表達(dá)質(zhì)粒，質(zhì)粒的構(gòu)建詳見材料和方法??部分。按照說明書轉(zhuǎn)染條件將ＭＹＣＮ質(zhì)粒和對應(yīng)的ＮＣ質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進(jìn)Ｈ６９細(xì)胞和??Ｈ４４６細(xì)胞，４８ｈ提取總ＲＮＡ，７２ｈ提取總蛋白，ｑＲＴ－ＰＣＲ結(jié)果顯示在Ｈ６９和??Ｈ４４６細(xì)胞中ＭＹＣＮ的ｍＲＮＡ水平顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（？值＜?０．００１）??（圖１－３－２?Ａ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Caspase Family Proteases and Apoptosis[J]. Ting-Jun FAN Li-Hui HAN Ri-Shan CONG Jin LIANG College of Marine Life Sciences,Division of Life Science and Technology,Ocean University of China,Qingdao 266003,China;College of Chemistry & Chemical Engineering,Ocean University of China,Qingdao 266003,China.  Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2005(11)



本文編號：3217869