目的酸性鞘磷脂酶（acid sphingomyelinase,ASMase）是鞘磷脂/神經(jīng)酰胺（ceramide,Cer）信號(hào)通路的關(guān)鍵酶,在細(xì)胞產(chǎn)生Cer的過(guò)程中起著至關(guān)重要的的作用;Cer主要以生物活性鞘脂的形式存在于細(xì)胞,在內(nèi)皮細(xì)胞中高度富集,可對(duì)多種細(xì)胞應(yīng)激作出反應(yīng),在許多生理和病理過(guò)程中起著重要作用,目前,對(duì)于癌癥的研究Cer是前沿話題。脂多糖（即革蘭氏陰性菌的內(nèi)毒素,由磷脂-多糖-蛋白質(zhì)復(fù)合物組成,LPS）當(dāng)給與一定濃度的劑量刺激時(shí)可誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞凋亡,但其中所涉及的分子機(jī)制尚不清楚。在此,我們研究了ASMase的作用和ASMase/Cer通路在LPS誘導(dǎo)的人肺腺癌細(xì)胞（pc9、A549）凋亡中的作用,為肺癌甚至各種腫瘤的治療提供新的臨床思路。方法1.使肺腺癌細(xì)胞pc9和A549暴露于不同濃度的LPS（200,150,100,50,10和0μg/ml）處理24,36和48小時(shí),通過(guò)CCK-8凋亡試劑盒,選取適當(dāng)?shù)恼T導(dǎo)細(xì)胞凋亡的適宜的濃度和時(shí)間。2.給予細(xì)胞不同濃度的丙咪嗪（imipramine,IM,酸性鞘磷脂酶抑制劑）處理,CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活力,選取濃度最大但對(duì)細(xì)胞本身... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

用LPS和IM處理pc9和A549細(xì)胞36小時(shí)，與對(duì)照組相比，LPS處理組細(xì)胞形態(tài)改變（放大倍數(shù)200x），*P＜0.05，**P＜0.01

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文-35-圖4IM和LPS對(duì)人肺腺癌pc9和A549細(xì)胞ASK1和caspase-3mRNA水平的影響。用0、150μg/mlLPS、20μmol/LIM+150μg/mlLPS、20μmol/LIM處理兩種細(xì)胞36h后，用RT-PCR方法檢測(cè)ASK1和caspase-3mRNA的表達(dá)水平。與對(duì)照組相比，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；與對(duì)應(yīng)的LPS處理組相比，#P＜0.05，##P＜0.01。Figure4EffectsofIMandLPSonASK1andcaspase-3mRNAlevelsofpc9andA549.Cellsweretreatedwith0、150μg/mlLPS、20μmol/LIM+150μg/mlLPS、20μmol/LIMfor36h,mRNAlevelofASK1andcaspase-3mRNAweredetectedbyRT-PCR.Comparingwiththecontrolgroup,*P＜0.05,**P＜0.01,***P＜0.001.ComparingwiththecorrespondingLPStreatmentgroup,#P＜0.05,##P＜0.01.

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文-36-用0、150μg/mlLPS、20μmol/LIM+150μg/mlLPS、20μmol/LIM處理pc9和A54936h后，應(yīng)用Westernblot法檢測(cè)pc9和A549細(xì)胞中ASK1、caspase-3和cleavedcaspase-3蛋白表達(dá)水平的變化，實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)三次。如圖所示，與對(duì)照組相較，LPS處理組明顯增加了細(xì)胞中cleavedcaspase-3、ASK1和caspase-3的蛋白量的表達(dá)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；而LPS與IM共孵育時(shí)，從結(jié)果可以看出兩種細(xì)胞中cleavedcaspase-3、ASK1和caspase-3蛋白質(zhì)的表達(dá)量可顯著被抑制，而且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。與此同時(shí)測(cè)算出clcas-3與caspase-3的灰度值比值，觀察兩組蛋白的表達(dá)量的變化。圖5IM和LPS對(duì)人肺腺癌pc9細(xì)胞ASK1、caspase-3和clcas-3蛋白水平的影響。用0、150μg/mlLPS、20μmol/LIM+150μg/mlLPS、20μmol/LIM處理兩種細(xì)胞36h后，用Westernblot方法檢測(cè)三種蛋白的表達(dá)水平。與對(duì)照組相比，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；與對(duì)應(yīng)的LPS處理組相比，#P＜0.05，##P＜0.01。測(cè)算出clcas-3與caspase-3的灰度值比值。Figure5EffectsofIMandLPSonASK1、caspase-3andclcas-3proteinlevelsofpc9.Cellsweretreatedwith0、150μg/mlLPS、20μmol/LIM+150μg/mlLPS、20μmol/LIMfor36h,expressionlevelsofthethreeproteinsweredetectedbyWesternblot.Comparingwiththecontrolgroup,*P＜0.05,**P＜0.01,***P＜0.001.ComparingwiththecorrespondingLPStreatmentgroup,#P＜0.05,##P＜0.01.Calculatingthegrayvalueclcas-3/caspase-3.3.4Westernblot法檢測(cè)LPS誘導(dǎo)的pc9和A549細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白ASK1、caspase-3和cleavedcaspase-3蛋白表達(dá)水平的變化


本文編號(hào)：3211419