目的酸性鞘磷脂酶（acid sphingomyelinase,ASMase）是鞘磷脂/神經(jīng)酰胺（ceramide,Cer）信號通路的關鍵酶,在細胞產(chǎn)生Cer的過程中起著至關重要的的作用;Cer主要以生物活性鞘脂的形式存在于細胞,在內(nèi)皮細胞中高度富集,可對多種細胞應激作出反應,在許多生理和病理過程中起著重要作用,目前,對于癌癥的研究Cer是前沿話題。脂多糖（即革蘭氏陰性菌的內(nèi)毒素,由磷脂-多糖-蛋白質(zhì)復合物組成,LPS）當給與一定濃度的劑量刺激時可誘導肺癌細胞凋亡,但其中所涉及的分子機制尚不清楚。在此,我們研究了ASMase的作用和ASMase/Cer通路在LPS誘導的人肺腺癌細胞（pc9、A549）凋亡中的作用,為肺癌甚至各種腫瘤的治療提供新的臨床思路。方法1.使肺腺癌細胞pc9和A549暴露于不同濃度的LPS（200,150,100,50,10和0μg/ml）處理24,36和48小時,通過CCK-8凋亡試劑盒,選取適當?shù)恼T導細胞凋亡的適宜的濃度和時間。2.給予細胞不同濃度的丙咪嗪（imipramine,IM,酸性鞘磷脂酶抑制劑）處理,CCK-8法檢測細胞活力,選取濃度最大但對細胞本身... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學安徽省

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

用LPS和IM處理pc9和A549細胞36小時，與對照組相比，LPS處理組細胞形態(tài)改變（放大倍數(shù)200x），*P＜0.05，**P＜0.01

安徽醫(yī)科大學碩士學位論文-35-圖4IM和LPS對人肺腺癌pc9和A549細胞ASK1和caspase-3mRNA水平的影響。用0、150μg/mlLPS、20μmol/LIM+150μg/mlLPS、20μmol/LIM處理兩種細胞36h后，用RT-PCR方法檢測ASK1和caspase-3mRNA的表達水平。與對照組相比，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；與對應的LPS處理組相比，#P＜0.05，##P＜0.01。Figure4EffectsofIMandLPSonASK1andcaspase-3mRNAlevelsofpc9andA549.Cellsweretreatedwith0、150μg/mlLPS、20μmol/LIM+150μg/mlLPS、20μmol/LIMfor36h,mRNAlevelofASK1andcaspase-3mRNAweredetectedbyRT-PCR.Comparingwiththecontrolgroup,*P＜0.05,**P＜0.01,***P＜0.001.ComparingwiththecorrespondingLPStreatmentgroup,#P＜0.05,##P＜0.01.

安徽醫(yī)科大學碩士學位論文-36-用0、150μg/mlLPS、20μmol/LIM+150μg/mlLPS、20μmol/LIM處理pc9和A54936h后，應用Westernblot法檢測pc9和A549細胞中ASK1、caspase-3和cleavedcaspase-3蛋白表達水平的變化，實驗至少重復三次。如圖所示，與對照組相較，LPS處理組明顯增加了細胞中cleavedcaspase-3、ASK1和caspase-3的蛋白量的表達，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；而LPS與IM共孵育時，從結果可以看出兩種細胞中cleavedcaspase-3、ASK1和caspase-3蛋白質(zhì)的表達量可顯著被抑制，而且差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。與此同時測算出clcas-3與caspase-3的灰度值比值，觀察兩組蛋白的表達量的變化。圖5IM和LPS對人肺腺癌pc9細胞ASK1、caspase-3和clcas-3蛋白水平的影響。用0、150μg/mlLPS、20μmol/LIM+150μg/mlLPS、20μmol/LIM處理兩種細胞36h后，用Westernblot方法檢測三種蛋白的表達水平。與對照組相比，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；與對應的LPS處理組相比，#P＜0.05，##P＜0.01。測算出clcas-3與caspase-3的灰度值比值。Figure5EffectsofIMandLPSonASK1、caspase-3andclcas-3proteinlevelsofpc9.Cellsweretreatedwith0、150μg/mlLPS、20μmol/LIM+150μg/mlLPS、20μmol/LIMfor36h,expressionlevelsofthethreeproteinsweredetectedbyWesternblot.Comparingwiththecontrolgroup,*P＜0.05,**P＜0.01,***P＜0.001.ComparingwiththecorrespondingLPStreatmentgroup,#P＜0.05,##P＜0.01.Calculatingthegrayvalueclcas-3/caspase-3.3.4Westernblot法檢測LPS誘導的pc9和A549細胞凋亡相關蛋白ASK1、caspase-3和cleavedcaspase-3蛋白表達水平的變化


本文編號：3211419