乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤,發(fā)病率居全世界女性惡性腫瘤的首位。乳腺癌目前的主要治療手段是手術(shù)切除結(jié)合放化療。但是仍然有部分腫瘤患者會(huì)出現(xiàn)腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。乳腺癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是致乳腺癌死亡的最重要的原因。乳腺癌死亡的患者中,約90%的人死于腫瘤轉(zhuǎn)移。腫瘤轉(zhuǎn)移實(shí)際是多步驟多基因參與的過程。在腫瘤轉(zhuǎn)移的過程中,腫瘤細(xì)胞往往發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）。對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移分子機(jī)制的研究有利于研發(fā)更有效的治療手段。近年來,研究認(rèn)為腫瘤干細(xì)胞在腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移過程中起著重要的作用。腫瘤干細(xì)胞是腫瘤中一小部分具有干細(xì)胞特性的細(xì)胞,不僅能夠自我更新也能夠分化產(chǎn)生不同的子代,對(duì)比起腫瘤中非干細(xì)胞,具有強(qiáng)大的成瘤性。多種腫瘤中存在腫瘤干細(xì)胞,如肺癌、結(jié)直腸癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、前列腺癌、肺癌等。乳腺癌干細(xì)胞是最早發(fā)現(xiàn)的實(shí)體瘤干細(xì)胞之一。CD44、CD24、乙醛脫氫酶1（Aldehyde dehydrogenase 1,ALDH1）是乳腺癌干細(xì)胞最常用的標(biāo)記分子。研究發(fā)現(xiàn)在乳腺癌中幾百個(gè)Lin-CD44+CD24-/low的細(xì)胞即可在NOD/SCID小鼠中形成種植瘤,而上千個(gè)非Lin-CD44+CD24-/low細(xì)胞不能... 

【文章來源】：大連醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：121 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一部分 PTPRD下調(diào)對(duì)乳腺癌細(xì)胞增生、凋亡、遷移和侵襲的影響
    （一）前言
    （二）材料和方法
        1. 材料
            1.1 細(xì)胞株
            1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器及材料
            1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        2. 方法
            2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及傳代
            2.2 PTPRDsi RNA瞬轉(zhuǎn)乳腺癌細(xì)胞
            2.3 CCK8增殖實(shí)驗(yàn)
            2.4 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的凋亡和周期
            2.5 劃痕實(shí)驗(yàn)
            2.6 Transwell遷移侵襲實(shí)驗(yàn)
            2.7 Western Blot
            2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    （三）結(jié)果
        1. PTPRD下調(diào)可以促進(jìn)MDA-MB-231 細(xì)胞遷移和侵襲襲
        2. PTPRD siRNA抑制細(xì)胞凋亡
        3. PTPRD siRNA對(duì)增生、細(xì)胞周期的影響
        4. PTPRD siRNA對(duì)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響
    （四）討論
    （五）結(jié)論
    （六）參考文獻(xiàn)
第二部分 PTPRD與乳腺癌干細(xì)胞之間的關(guān)系及小鼠成瘤實(shí)驗(yàn)
    （一）前言
    （二）材料和方法
        1. 材料
            1.1 細(xì)胞系與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器和試劑
        2. 方法
            2.1 乳腺球培養(yǎng)
            2.2 RNA抽提
            2.3 SYBRGreen染料法qRT-PCR
            2.4 細(xì)胞蛋白提取及定量
            2.5 Western Blot
            2.6 免疫熒光細(xì)胞化學(xué)
            2.7 克隆形成實(shí)驗(yàn)
            2.8 流式細(xì)胞技術(shù)檢測CD44~+/CD24~-細(xì)胞比例
            2.9 磁珠分選CD44~+/CD24~-細(xì)胞群
            2.10 裸鼠種植瘤模型的建立
            2.11 組織包埋、切片
            2.12 HE染色
            2.13 組織蛋白的提取
            2.14 組織RNA提取
            2.15 免疫組織化學(xué)法
            2.16 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    （三）結(jié)果
        1. PTPRD siRNA對(duì)CD44~+/CD24~-細(xì)胞群比例的影響
        2. PTPRD siRNA對(duì)乳腺癌細(xì)胞球形成能力的影響
        3. PTPRD siRNA對(duì)乳腺癌全克隆形成的影響
        4. PTPRD、STAT3、P-STAT3等在乳腺癌干細(xì)胞中的表達(dá)
        5. 免疫熒光法檢測PTPRD在乳腺癌干細(xì)胞及非干細(xì)胞群的表達(dá)
        6. PTPRD下調(diào)對(duì)癌干細(xì)胞標(biāo)記分子ALDH1及OCT-4 表達(dá)的影響
        7. PTPRDsiRNA對(duì)乳腺癌MDA-MB-231 細(xì)胞裸鼠種植瘤生長的抑制作用
    （四）討論
    （五）結(jié)論
    （六）參考文獻(xiàn)
第三部分 PTPRD作用的分子機(jī)制的探討
    （一）前言
    （二）材料和方法
        1. 材料
        2. 方法
            2.1 IL-6 作用于細(xì)胞
            2.2 qRT-PCR
            2.3 Western Blot
            2.4 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的凋亡
            2.5 劃痕實(shí)驗(yàn)
            2.6 CCK-8 實(shí)驗(yàn)
            2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    （三）結(jié)果
        1. IL-6 可以促進(jìn)細(xì)胞遷移，抑制凋亡
        2. IL-6 作用過程中PTPRD、P-STAT3，EMT相關(guān)蛋白及乳腺癌干細(xì)胞標(biāo)記分子水平的變化
        3. PTPRD si RNA對(duì)STAT3表達(dá)和活化的影響
    （四）討論
    （五）結(jié)論
    （六）參考文獻(xiàn)
第四部分 PTPRD、P-STAT3在乳腺癌組織中的表達(dá)與臨床病理特點(diǎn)和預(yù)后的關(guān)系
    （一）前言
    （二）材料和方法
        1. 材料
        2. 方法
            2.1 乳腺癌組織收集、臨床病理參數(shù)收集及組織芯片的制作
            2.2 免疫組織化學(xué)法
            2.3 免疫組織化學(xué)結(jié)果判定
            2.4 臨床病理資料收集及預(yù)后隨訪
            2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    （三）結(jié)果
        1. PTPRD、P-STAT3在乳腺癌及乳腺組織中的表達(dá)
        2. PTPRD、P-STAT3的表達(dá)與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系
        3. PTPRD、P-STAT3的表達(dá)與預(yù)后之間的關(guān)系
    （四）討論
    （五）結(jié)論
    （六）參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況
致謝



本文編號(hào)：3206374