背景:過氧化物酶體增殖物激活受體（peroxisome-proliferators-activated receptors,PPARs）共包含PPARα、PPARδ、PPARγ三個(gè)成員。作為PPARs家族成員之一,PPARδ在調(diào)控炎癥、代謝、腫瘤發(fā)生等方面發(fā)揮重要的作用,然而PPARδ轉(zhuǎn)錄后修飾對(duì)腫瘤進(jìn)展的影響目前依然不清楚。大量研究表明表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor,EGFR）異常表達(dá)或激活促進(jìn)腫瘤發(fā)生。EGFR屬于酪氨酸激酶,我們課題組前期研究表明,EGFR能誘導(dǎo)PPARγ磷酸化,從而抑制PPARγ抗腫瘤功能,該研究顯示EGFR能誘導(dǎo)底物磷酸化,從而改變其功能。然而EGFR與PPARδ相關(guān)性及其作用機(jī)制目前不是很清楚。方法:利用免疫共沉淀、Western blot分析相關(guān)蛋白的表達(dá)以及PPARδ與EGFR相關(guān)性;利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法鑒定EGFR誘導(dǎo)PPARδ磷酸化位點(diǎn);隨后進(jìn)一步利用體外磷酸化方法確定EGFR誘導(dǎo)PPARδ-Y108位點(diǎn)磷酸化;利用雙熒光報(bào)告分析PPARδ活力,及其下游代謝相關(guān)基因SLC1A5和Glut1轉(zhuǎn)錄活... 

【文章來源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 EGFR
        1.1.1 EGFR概述
        1.1.2 EGFR胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)
    1.2 PPARδ
        1.2.1 PPARδ概述
        1.2.2 PPARδ信號(hào)與腫瘤
    1.3 腫瘤細(xì)胞代謝
        1.3.1 腫瘤細(xì)胞糖代謝
        1.3.2 腫瘤細(xì)胞氨基酸代謝
    1.4 研究意義
    1.5 主要研究內(nèi)容與技術(shù)路線
        1.5.1 主要研究內(nèi)容
        1.5.2 技術(shù)路線
第二章 EGFR誘導(dǎo)PPARδ-Y108位點(diǎn)磷酸化
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞系與質(zhì)粒
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑、耗材與抗體
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 質(zhì)粒構(gòu)建
        2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.3 細(xì)胞加藥處理
        2.2.4 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        2.2.5 細(xì)胞總蛋白提取
        2.2.6 細(xì)胞蛋白濃度測定與定量
        2.2.7 Western blot檢測
        2.2.8 免疫共沉淀
        2.2.9 磷酸化位點(diǎn)比對(duì)分析
        2.2.10 質(zhì)譜分析
        2.2.11 蛋白純化
        2.2.12 體外磷酸化
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        2.3.1 EGFR誘導(dǎo)PPARδ-Y108 位點(diǎn)磷酸化
    2.4 本章小結(jié)
第三章 EGFR/PPARδ信號(hào)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞代謝
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 細(xì)胞系與質(zhì)粒
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)耗材、試劑與抗體
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2.2 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        3.2.3 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測
        3.2.4 熒光定量PCR檢測
        3.2.5 Western blot檢測
        3.2.6 腫瘤細(xì)胞葡萄糖消耗檢測
        3.2.7 腫瘤細(xì)胞乳酸釋放檢測
        3.2.8 腫瘤細(xì)胞谷氨酰胺攝入檢測
        3.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.3.1 PPARδ-Y108 磷酸化增加Glut1和SLC1A5 表達(dá)
        3.3.2 PPARδ-Y108 磷酸化促進(jìn)腫瘤細(xì)胞代謝
    3.4 本章小結(jié)
第四章 PPARδ-Y108 磷酸化促進(jìn)腫瘤生長
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 細(xì)胞系與質(zhì)粒
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑、耗材與抗體
        4.1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        4.2.2 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        4.2.3 G418 篩選細(xì)胞
        4.2.4 軟瓊脂集落形成分析
        4.2.5 構(gòu)建裸鼠異種移植瘤模型
        4.2.6 腫瘤組織Western blot檢測
        4.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)分析
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        4.3.1 PPARδ-Y108 磷酸化促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖
        4.3.2 PPARδ-Y108 磷酸化促進(jìn)腫瘤生長
    4.4 本章小結(jié)
第五章 PPARδ-Y108 磷酸化增加腫瘤細(xì)胞化療抗性
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 細(xì)胞系與質(zhì)粒
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        5.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑、耗材
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        5.2.2 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        5.2.3 G418 篩選細(xì)胞
        5.2.4 MTT檢測
        5.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)分析
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        5.3.1 PPARδ-Y108 磷酸化增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞化療抗性
    5.4 本章小結(jié)
第六章 總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
在讀期間學(xué)術(shù)成果
參與課題



本文編號(hào)：3196835